ジフテリア毒素のエンドソーム膜通過機構の解析

白喉毒素内体膜通过机制分析

• 批准号: 06248229
• 负责人: 目加田 英輔
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06248229/
• 关键词: ジフテリア毒素; エンドサイトーシス; 膜通過

本研究は、ジフテリア毒素を材料に、細胞のエンドサイトーシス機構、エンドサイトーシスに関わるリセプターおよびその他のマシナリー、蛋白質の膜通過機構の解析、をめざすものである。今年度の成果は次の通りである。1.ジフテリア毒素リセプター(DTR/HB-EGF)の毒素結合部位の解析を、ジフテリア毒素結合能がないマウスHB-EGFとヒトHB-EGFのキメラ分子を作製して、詳細に調べた結果、ジフテリア毒素はHB-EGFのEGFドメインに結合することを明らかにした。また、ジフテリア毒素結合部位とEGFリセプター結合部位は非常に近接しているかオーバーラップしている可能性が示された。2.DTR/HB-EGFの細胞質側領域に改変を加え、エンドサイトーシスへの影響を調べた。従来、他の系ではエンドサイトーシスされるためのシグナルとして細胞質側領域に存在するTyl残基を含む構造が重要であると云われている。DTR/HB-EGFの細胞質領域には2個のTylが存在するので、それらを単独で、あるいは両方を同時に改変して、ジフテリア毒素の結合、ジフテリア毒素感受性について調べたが、特に大きな影響は認められなかった。このことから、DTR/HB-EGFでは従来とは異なる認識で、あるいは機構でエンドサイトーシスが行なわれていることが示唆された。3.パ-ミアライズ細胞を用いてジフテリア毒素のエンドソーム膜通過機構について解析した。数種類のジフテリア毒素変異分子についてエンドソーム膜通過効率を調べた結果、疎水領域に変異があるE349、D352に膜通過効率の著しい低下が認められ、これらの部位が膜通過過程に非常に重要である事が明らかとなった。また、ニッキング酵素欠失細胞を用いた実験から、膜通過に先立って、AフラグメントとBフラグメントの間にニックが入っている必要が示唆された。

This study focuses on the analysis of toxin materials, cellular transport mechanisms, cellular transport mechanisms, protein membrane transport mechanisms, etc. This year's achievements are reversed. 1. Analysis of toxin binding site of DTR/HB-EGF, determination of toxin binding energy of DTR/HB-EGF, determination of HB-EGF binding site of DTR/HB-EGF, determination of HB-EGF binding site of DTR/HB-EGF binding The possibility that the EGF binding sites are very close to each other is shown. 2. The effect of DTR/HB-EGF on the cytoplasmic domain was investigated. The presence of Tyl residues in the cytoplasmic domain is important for the structure of the protein. DTR/HB-EGF has two tyls in the cytoplasmic domain, which are independent of each other, and are modified simultaneously. The binding of DTR/HB-EGF to the toxin, the sensitivity of DTR/HB-EGF to the toxin, and the special effects of DTR/HB-EGF on the response to DTR/HB-EGF are discussed. DTR/HB-EGF is the most important factor in the development of the new system. 3. The analysis of toxin by the mechanism of cell culture. Several types of toxins are different from each other. The membrane passage efficiency is adjusted. The membrane passage efficiency is different from each other in the water field. The membrane passage efficiency is lower. The membrane passage process is very important. In addition to the above, it is also necessary to conduct research on the application of enzyme in the cell.

项目成果

Iwamoto,R.: "Heparin-binding EGF-like growth factor,which acts as the diphtheria toxin receptor,forms a complex with membrane protein DRAP27/CD9,which up-regulates functional receptors and diphtheria toxin sensitivity." EMBO J.13. 2322-2330 (1994)

Iwamoto, R.：“肝素结合 EGF 样生长因子充当白喉毒素受体，与膜蛋白 DRAP27/CD9 形成复合物，上调功能受体和白喉毒素敏感性。”