末梢血幹細胞中の樹状細胞の誘導とその機能に関する研究

外周血干细胞树突状细胞的诱导及其功能研究

• 批准号: 10770515
• 负责人: 芦原 英司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770515/
• 关键词: 末梢血幹細胞; CD34陽性細胞; 樹状細胞; FLT-3 ligand

1.本研究では造血器悪性腫瘍、及び固形腫瘍患者の化学療法後にG-CSF投与を併用し、白血球回復期に動員したヒト末梢血幹細胞(PBSC)からCD34陽性細胞を純化分離し(純度97.0%)、樹状細胞の誘導を行い、昨年度はPBSC中のCD34陽性細胞からGM-CSF+IL-4、GM-CSF+IL-4+FLの2群にわけて10日間液体培養を行い、FL添加群にて有意にCD1a陽性の樹状細胞が誘導され増加することを観察した。今年度はPBSC中のCD34陽性細胞を用いてGM-CSF+IL-4+FLを添加し、fibronection-coated(FN(+)),fibronectin-uncoated(FN(-))の2種類のフラスコで液体培養を行った。(1)20日間培養後の細胞数はFN(+)群で15倍、FN(-)群では12倍であった。(2)次に蛍光標識のCD1a、CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DRを用いて誘導された樹状細胞の表現型をフローサイトメトリーにて評価した。【table】両群に差は認めなかったが、本培養系でCD34陽性細胞から樹状細胞が誘導された。2.次にPBSCを2時間incubateした後、フラスコに付着した付着細胞を用いて10%FCS加RPMIにてGM-CSF+IL-4+FLを用いて10日間液体培養し樹状細胞の誘導を行い、樹状細胞の表現型をフローサイトメトリーにて評価した。【table】以上よりPBSC中の付着細胞からCD1a陽性樹状細胞が誘導された。3.現在これら誘導されたCD1a細胞を用いて同種、または自己のT細胞の増殖刺激効果、及び抗原提示されたT細胞による抗腫瘍効果をLDH release assayを用いて継続し検討中である。

1. This study focused on the concomitant use of G-CSF and the mobilization of white blood cell recovery period in patients with hematopoietic organ tumors and solid tumors after chemotherapy. Purification and isolation of peripheral blood stem cells (PBSC), CD34-positive cells (purity 97.0%), and induction of dendritic cells , 2 groups of CD34-positive cells in PBSC last year were GM-CSF+IL-4 and GM-CSF+IL-4+FL. During the 10-day liquid culture, the FL was added to the group and the CD1a-positive dendritic cells were induced and the cells were increased and the cells were added. This year, 2 types of CD34-positive cells in PBSC were cultured in liquid with GM-CSF+IL-4+FL added, fibronection-coated (FN (+)), and fibronectin-uncoated (FN (-)). (1) The number of cells after 20 days of culture was 15 times that of the FN(+) group and 12 times that of the FN(-) group. (2) The phenotype of dendritic cells induced by sub-light labeling of CD1a, CD14, CD80, CD83, CD86, and HLA-DR was evaluated using the same method. [table] 両Group of different types of cells, CD34-positive cells, and dendritic cells of this culture system can be induced. 2. After PBSC was incubated for 2 hours, the cells were incubated with 10% FCS plus RPMI GM-CS. F+IL-4+FL was used to induce dendritic cells in liquid culture for 10 days and to evaluate the phenotype of dendritic cells. 【table】The above is the induction of CD1a-positive dendritic cells in the attached cells and CD1a-positive dendritic cells in PBSC. 3. Nowadays, it can induce CD1a cells using the same species, use its own T cells to stimulate the proliferation of T cells, and use antigen prompting T cells to produce anti-tumor effects and LDH release. The assay is done using the test method.