末梢血幹細胞中の樹状細胞の誘導とその機能に関する研究

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1.本研究では造血器悪性腫瘍、及び固形腫瘍患者の化学療法後にG-CSF投与を併用し、白血球回復期に動員したヒト末梢血幹細胞(PBSC)からCD34陽性細胞を純化分離し(純度97.0%)、樹状細胞の誘導を行い、昨年度はPBSC中のCD34陽性細胞からGM-CSF+IL-4、GM-CSF+IL-4+FLの2群にわけて10日間液体培養を行い、FL添加群にて有意にCD1a陽性の樹状細胞が誘導され増加することを観察した。今年度はPBSC中のCD34陽性細胞を用いてGM-CSF+IL-4+FLを添加し、fibronection-coated(FN(+)),fibronectin-uncoated(FN(-))の2種類のフラスコで液体培養を行った。(1)20日間培養後の細胞数はFN(+)群で15倍、FN(-)群では12倍であった。(2)次に蛍光標識のCD1a、CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DRを用いて誘導された樹状細胞の表現型をフローサイトメトリーにて評価した。【table】両群に差は認めなかったが、本培養系でCD34陽性細胞から樹状細胞が誘導された。2.次にPBSCを2時間incubateした後、フラスコに付着した付着細胞を用いて10%FCS加RPMIにてGM-CSF+IL-4+FLを用いて10日間液体培養し樹状細胞の誘導を行い、樹状細胞の表現型をフローサイトメトリーにて評価した。【table】以上よりPBSC中の付着細胞からCD1a陽性樹状細胞が誘導された。3.現在これら誘導されたCD1a細胞を用いて同種、または自己のT細胞の増殖刺激効果、及び抗原提示されたT細胞による抗腫瘍効果をLDH release assayを用いて継続し検討中である。