病的血管新生を標的とした新規歯周病治療薬の開発

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我々はこれまで,血管新生促進因子であるMMP(matrix metalloproteinase)発現に対するロキシスロマイシンの影響を調べ,1)ロキシスロマイシンは,TNF-αが誘導するMMP-1 mRNA発現を抑制する,2)ロキシスロマイシンは,TNF-αが誘導するMMP-1,MMP-2産生を抑制することを報告した.また,ロキシスロマイシンが転写因子AP-1の活性化を抑制することも既に報告している.今回我々は,MMP-1産生に関与する転写因子Ets-1に対するロキシスロマイシンの影響を調べるために以下の実験をおこなった.1.ヒト歯根膜細胞の培養歯根膜細胞を10%ウシ胎児血清を含むα-MEM(α-modifided minimum essential medium)培地にて培養した.実験には継代数5〜10代までを用い,コンフルエントに達した細胞を腫瘍壊死因子(TNF-α)とロキシスロマイシンを含む培地に交換して培養し,次の実験を行った.2.ゲルシフト法によるEts-1活性化の検討培養細胞から核タンパクをDignamらの方法で抽出し,ゲルシフト法によりEts-1活性化に対するロキシスロマイシンの作用を検討した.3.ノーザンブロット法によるets-1 mRNA発現の検討培養細胞の全RNAをAGPC(Acid Guanidium-Phenol-Chloroform)法で抽出し,ノーザンブロット法によりets-1 mRNA発現に対するロキシスロマイシンの作用を検討した.以上の実験から、次のような結果が得られた.1.ヒト歯根膜細胞培養系において,TNF-αは,Ets-1の活性化およびets-1 mRNA発現を誘導した.2.ロキシスロマイシンは,TNF-αが誘導するEts-1の活性化を抑制しなかった.3.ロキシスロマイシンは,TNF-αが誘導するets-1 mRNA発現を抑制した.ロキシスロマイシンは転写因子AP-1の活性化を抑制することや,ets-1 mRNA発現を抑制することによって,MMP-1の産生を抑制することが示唆された.