ヒトグリア細胞に特異的に発現する新規分子の遺伝子クローニング

在人胶质细胞中特异性表达的新分子的基因克隆

基本信息

批准号：
12780566
负责人：
横尾英明
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780566/
关键词：
astrocyte oligodendrocyte monoclonal antibody immunohistochemistry

项目摘要

中枢神経系におけるグリア細胞の重要性は生理学的にも病理学的にもますます認識されつつある。未解明な点の多い脳神経系において、得られた知見を速やかに応用のためには新しいマーカーの開発が不可欠と考えて、我々はグリアを認識する新しい抗体の開発に取り組み、そのcharacterizationを行うことで細胞の機能に迫るアプローチを取ってきた。PRAS-4抗体はヒトの灰白質に分布するアストロサイトを特異的に認識する抗体として開発されたもので、ヒトの生理的条件下における発現は論文などで発表済みであるが、分子の機能を探る場合、培養に移行させて様々な条件を与えて検討するといったin vitroの実験系の構築が必要である。しかしヒトのグリア細胞の初代培養は通常得ることはできないので、動物実験への移行を模索する目的でラットにおいてPRAS-4抗原の発現を調べたところ、ヒトとほとんど同じであることがわかった。初代培養下においてもPRAS-4抗原はアストロサイトに発現されていることがわかり、ラットBergmannグリアの培養系を構築して機能解析を試みた。同細胞に発現されているグルタミン酸レセプターをアデノウイルスベクターを用いて非生理的なものに変換してCaイオンを流入過剰または減少の状態にしたところ、いずれの場合においてもPRAS-4抗原は保持された。PRAS-4抗原はミトコンドリア膜に存在する蛋白質であり、Caイオンの動態との関連が想像されていたが、細胞内カルシウム値の変動によってPRAS-4抗原の発現に明らかな変化はなく、ヒトおよびラットにおいて構成的に発現される分子であることが示唆された。OLIG-1抗体は組織化学的な手法により、オリゴデンドロサイトの核膜ならびに細胞膜に発現する蛋白抗原であることが明らかにされ、我々の知る限りこのような分布を示す分子は知られておらず、一層の研究を進めるため生化学的な分析を計画中である。

神经胶质细胞在中枢神经系统中的重要性在生理和病理上越来越被识别。在具有许多未知点的大脑中，新标记的发展对于快速应用所获得的知识至关重要，因此我们一直致力于开发识别神经胶质的新抗体，并通过执行表征来采取细胞功能的方法。 PRAS-4抗体是作为一种抗体开发的，该抗体特异性地识别了人类灰质中分布的星形胶质细胞，尽管在人类生理条件下的表达已经在论文和其他论文中发表，但在探索分子的功能时，有必要构建体外实验系统，例如将其转移到培养物和提供各种条件上，以考虑其考虑。但是，通常不可用人神经胶质细胞的原发性培养物，因此，当我们研究大鼠中Pras-4抗原的表达以探索向动物实验的过渡时，我们发现它们与人几乎相同。已经发现，即使在原发性培养物中，PRAS-4抗原也在星形胶质细胞中表达，我们试图通过构建大鼠Bergmann Glials的培养系统来分析功能。当在同一细胞中表达的谷氨酸受体使用腺病毒载体转化为非生理学的受体时，CA离子被流入或减少，在所有情况下，PRAS-4抗原都保留了。 PRAS-4抗原是线粒体膜中存在的一种蛋白质，尽管它设想它与CA离子的动力学相关，但由于细胞内钙水平的波动而导致的Pras-4抗原表达并没有明显变化，这表明它是一种成分构成了肠道和人类和人类和属于人类和属于人类和属于人类的抗原。组织化学技术已经揭示了Olig-1抗体是在核膜和少突胶质细胞的细胞膜中表达的蛋白抗原，据我们所知，目前尚无具有这种分布的分子的分子，目前正在进行生物化学分析以进一步研究。