Gタンパク質共役受容体に対する新規リガンド検索系の開発

开发新的 G 蛋白偶联受体配体搜索系统

• 批准号: 12780579
• 负责人: 武田 茂樹
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Gunma University (2001)The University of Tokyo (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780579/
• 关键词: Gタンパク質共役受容体; リガンド検索; ゲノム; オーファン受容体; リガンドスクリーニング

(1)GPCRに対する効率の良いリガンド検索系の構築我々は受容体とGαの融合タンパク質を昆虫細胞に発現させ、その膜画分を用いて[^<35>S]GTPγSの取込み量を指標に受容体とリガンドとの相互作用を定量的に解析できる活性測定系を確立した。(2)モデル実験によるリガンド検索の可能性の検証実際の生体内リガンド検索のモデルとして、ノシセプチン受容体とGi2αの融合タンパク質を脳内のノシセプチンを検出することを試み、この方法を用いて新規のGPCRに対する生体内リガンドを同定することが可能であることが示した。(3)ヒトゲノム情報を用いたGPCR遺伝子の網羅的検索ヒトゲノム配列情報から新規のGPCR遺伝子を50個同定した。また得られた50個の新規GPCRについてヒトの各種臓器のRNAサンプルを用い、RT-PCR法により発現の有無を調べた。(4)新規受容体遺伝子とGi1, Gs, G16のαサブユニットと融合させた遺伝子の作成得られた新規受容体とGαの融合タンパク質を用いたリガンド検索を行うため、各種Gαとの融合遺伝子を系統的に作成し、融合遺伝子を昆虫細胞や動物細胞で発現させた。(5)新規受容体に対するリガンドのスクリーニング作成した受容体とGαの融合タンパク質を用いて既知物質や脳抽出画分をスクリーニングした結果、これまでにすでに0.1mM-前後で反応するリガンドが11種類、nMレベルで反応するリガンドが1種類得られている。これらの結果は新規受容体に対するスクリーニングが確実に進行していることを示しており、今後は生体内生理活性物質や投与可能な薬剤の同定が期待できる。

(1) GPCR に す seaborne る good working rate の い リ ガ ン ド 検 build my 々 cable system の は by alpha の と G let body fusion タ ン パ ク qualitative を insect cell に 発 now さ せ, そ の membrane points を used い て [^ < > 35 S] GTP gamma S の made take 込 に を み quantity index by the capacity of body と リ ガ ン ド と の interaction を quantitative analytical で に き を る activity determination department establish し た. (2) モ デ ル be 験 に よ る リ ガ ン ド 検 cable の possibility is の 検 card be interstate の born in vivo リ ガ ン ド 検 cable の モ デ ル と し て, ノ シ セ プ チ ン by let body と Gi2 alpha の fusion タ ン パ ク qualitative を 脳 within の ノ シ セ プ チ ン を 検 out す る こ と を み, こ の way を with い て new rules の GPCR に す seaborne る born in vivo リ ガ ン ド を with fixed す る こ と Youdaoplaceholder0 may である とが とが とが indicate た. (3) ヒ ト ゲ ノ ム intelligence を with い た GPCR heritage 伝 son の snare 検 cable ヒ ト ゲ ノ ム match column intelligence か ら new rules の GPCR heritage 伝 son を 50 with fixed し た. ま た have ら れ た 50 の new rules GPCR に つ い て ヒ ト の various viscera の RNA サ ン プ ル を い, rt-pcr method に よ り 発 is の presence of を adjustable べ た. (4) The new regulation of the acceptor remains 伝 subunits とGi1, Gs G16 の alpha サ ブ ユ ニ ッ ト と fusion さ せ た posthumous son 伝 の is made to ら れ た new rules by alpha の と G let body fusion タ ン パ ク qualitative を with い た リ ガ ン ド 検 cable line を う た め, all kinds of G alpha と の fusion heritage 伝 に し consummate and fusion of を system 伝 son を insect cell や animal cell で 発 now さ せ た. (5) new rules by let body に す seaborne る リ ガ ン ド の ス ク リ ー ニ ン グ made し た by alpha の と G let body fusion タ ン パ ク qualitative を with い て already know material や 脳 draw points を ス ク リ ー ニ ン グ し た results, こ れ ま で に す で に 0.1 mM - で before and after the 応 す る リ ガ ン ド が 11 species, nM レ ベ ル で anti 応 す る リ ガ ン ド が ら 1 species Youdaoplaceholder0 れて る. こ れ ら の results は new rules by let body に す seaborne る ス ク リ ー ニ ン グ が indeed be に for し て い る こ と を shown し て お り, physiological active substances in the future は born may cast with や な 薬 tonic の with fixed が expect で き る.

项目成果

武田 茂樹, 芳賀 達也: "生物化学実験講座"受容体機能の測定法""東京化学同人. 6 (2001)

武田茂树、芳贺达也：《生物化学实验教程》受体功能的测量方法》《东京化学同人》6(2001)。

Z.-D.Guo et.al.: "Receptor-Gα fusion proteins as a tool for ligand screening"Life Science. (in press).

Z.-D.Guo 等人：“受体-Gα 融合蛋白作为配体筛选的工具”生命科学（正在出版）。

武田茂樹,芳賀達也: "「受容体機能の測定法」生物化学実験講座"東京化学同人(in press).

Shigeki Takeda、Tatsuya Haga：“受体功能的测量”生物化学实验课程，东京化学同人（出版中）。