ソフトな分子間相互作用を認識できるペプチドプローブの開発と応用

识别软分子间相互作用的肽探针的开发及应用

• 批准号: 16048202
• 负责人: 武田 茂樹
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048202/
• 关键词: Gタンパク質共役受容体; ファージディスプレイライブラリー; アロステリックリガンド

膜上でのソフトな分子間相互作用はtwo-hybrid法や免疫沈降法などでは解析できないことが問題である。そこで本研究ではソフトな分子間相互作用を特異的に阻害できるペプチドプローブをファージディスプレイライブラリーから同定することを試みる。細胞膜に対しペプチドのファージディスプレイライブラリーを作用させて、特異的に少数のみのファージが結合する条件を実現する。そこにアゴニストなどの刺激を与えた場合に刺激を受けたタンパク質が構造変化し分子間相互作用を起こすことにより排除されたファージを得る。そしてそのファージから得られたペプチドがソフトな分子間相互作用を阻害あるいは探知できるプローブとして利用できるかどうか検証する。まずモデル実験としてはGタンパク質共役受容体と共役するGタンパク質のαサブユニットを人工的に融合させたものを発現させた細胞膜を用いた。酸添加条件で溶出したファージから8種類、アセチルコリン添加条件で溶出したファージから2種類のペプチド配列を得た。そのうち、酸添加条件で溶出したファージ1種類とアセチルコリン添加条件で溶出したファージ2種類は12残基中、同一の箇所で4残基が一致し、2残基は類縁のアミノ酸であった。そこでこれら3種のペプチド配列でもっとも相同性が高い部分の配列をもつ6量体ペプチドを化学合成しリガンド活性を示すかどうか調べた。するとこのペプチドは1μMのカルバコールの存在下でさらに受容体の活性化を20%程度促進するアロステリックリガンドとしての性質を示した

The molecular interaction on the membrane is a two-hybrid method and an immunoprecipitation method. In this study, the molecular interaction between the two molecules was studied. Cell membrane binding conditions are realized by a few specific factors. The structure of the molecule is affected by the stimulus. It's a good idea to explore the molecular interactions between molecules and to use them to test them. The cell membrane was developed by the fusion of the cell membrane and the plasma. Acid addition conditions for dissolution of 8 species, 2 species and 3 species In addition to the above conditions, 4 residues of the same residue are identical to each other, and 2 residues are similar to each other. The three species are selected from the group consisting of six species, and the three species are selected from the group consisting of six species. In the presence of a 1μM cell, the activation of the cell is promoted by 20%.

项目成果

Mapping of Functional Sites on the Primary Structure of the Contractile Tail Sheath Protein of Becteriophage T4 by Mutation Analysis

通过突变分析定位噬菌体 T4 收缩尾鞘蛋白一级结构的功能位点

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Acta 1699
• 作者: S.Takeda;M.Suzuki;T.;Yamada;N.Kageyama;F.Arisaka
• 通讯作者: F.Arisaka

The receptor-Ga fusion protein as a tool for ligand screening : a model study using a nociceptin receptor-Gi2a fusion Protein

受体-Ga融合蛋白作为配体筛选的工具：使用伤害感受素受体-Gi2a融合蛋白的模型研究

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biochem.(Tokyo) 135
• 作者: S.Takeda;T.Okada;M.Okamura;T.Haga;J.Tanaka;N.Minamino
• 通讯作者: N.Minamino

G蛋白質共役受容体機能の解析方法

G蛋白偶联受体功能分析方法

• 发表时间: 2005
• 期刊: 医学のあゆみ 212
• 作者: 小池太吾;武田茂樹
• 通讯作者: 武田茂樹

Stimulation of Intracellular Calcium Increases and Prostaglandin E2 Generation in Chinese Hamster Ovary Cells Expressing Receptor-Ga16 Fusion Proteins

表达受体 Ga16 融合蛋白的中国仓鼠卵巢细胞刺激细胞内钙增加和前列腺素 E2 生成

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biochem.(Tokyo) 135
• 作者: H.Suga;S.Takeda;T.Okada;M.Okamura;T.Haga
• 通讯作者: T.Haga

Crystallization and preliminary X-ray analysis of gene product 44 from becteriophage Mu

噬菌体 Mu 基因产物 44 的结晶和初步 X 射线分析

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Cryst. F16
• 作者: Y.Kondou;D.Kitazawa;S.Takeda;E.Yamashita;M.Mizuguchi;K.Kawano;T.Tsukihara
• 通讯作者: T.Tsukihara