Gタンパク質共役受容体に働く新規治療薬シーズの探索と活性評価

寻找作用于G蛋白偶联受体的新治疗药物种子并评估其活性

• 批准号: 18032016
• 负责人: 武田 茂樹
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18032016/
• 关键词: 糸状菌; Gタンパク質共役受容体; インシュリン分泌; リガンドスクリーニング; ハイスループットスクリーニング; モルヒネ

Gタンパク質共役受容体(GPCR:G-protein coupled receptor)は、細胞膜表面上に存在する膜タンパク質で、細胞内に情報を伝える生体内センサーとして働いている。糸状菌は様々な二次代謝産物を産生する能力を持っており、新規リガンド探索に有用であると考えられる。にもかかわらず、糸状菌由来のGPCRリガンドの検索・開発はあまり行われていない。これはGPCRの活性測定が通常そのGPCRを発現させた生細胞を用いるため、多様な物質を含む糸状菌培養液をもちいても共雑物による非特異的な細胞の反応が多すぎて、正確で信頼性のある活性測定が行えないためである。本研究で用いた[35S]GTPγS結合活性測定はGPCR-Gα融合タンパク質ヘのアゴニスト依存的な[35S]GTPγS結合活性を測定し定量化することでリガンド活性を調べる方法である。この昆虫細胞で調製した融合タンパク質膜画分を用いた[35S]GTPγS結合活性測定は、糸状菌培養液中の共雑物の影響をあまり受けず、GPCRに作用するリガンドを特異的に検出することができるので、生細胞を用いた通常の活性測定法の欠点を克服した方法といえる。このため、混合物のスクリーニングには最適である。本研究ではこれまでに7つのGPCRに対して430種類の糸状菌培養液を用いて活性測定を行い、4つのGPCRに対して合計10個のアンタゴニスト、18個のアゴニスト活性を見出した。これらの結果は糸状菌培養液が新規GPCRリガンドの発見のためのよい材料であること、また我々のGPCR-Gα融合タンパク質を用いた[35S]GTPγS結合活性測定のスクリーニング系が高い効率をもつことをよく示している。また、このうちの1つの組み合わせについて動物実験を行い、ある糸状菌がすい臓に発現するGPR119を活性化することにより、インシュリンの分泌を促進して血糖値を下げる働きがあることがわかった。

GPCR (G-protein coupled receptor) is a protein receptor that exists on the surface of cell membranes and transmits information inside cells. The ability of bacteria to produce secondary metabolites remains, new regulations are explored and useful. The GPCR of the origin of the bacteria and the origin of the bacteria are detected and developed. The activity of GPCR is usually determined by GPCR detection, cell culture, non-specific cell culture, multiple substances, bacterial culture medium, and accurate activity determination. In this study, we used the [35S]GTPγ S binding activity assay to quantify and modulate the GPCR-Gα fusion protein binding activity. The assay of [35S]GTPγS binding activity in the plasma membrane assay of insect cells was performed to overcome the shortcomings of the usual activity assay methods for the regulation of fusion proteins in insect cells and the effects of co-enzymes in bacterial culture solutions. The mixture is optimal. In this study, 7 GPCRs were used to determine the activity of 430 species of bacteria culture medium, 4 GPCRs were used to determine the activity of 10 species, and 18 species were used to determine the activity of bacteria culture medium. The results showed that the GPCR-Gα fusion protein was used in the determination of [35S]GTPγS binding activity in the culture solution of GPCR-Gα fusion protein, and the GPCR-Gα fusion protein was used in the determination of GTPγS binding activity in the culture solution of GPCR-Gα fusion protein. GPR119 is activated in the presence of bacteria and promotes secretion of glucose.

项目成果

Gタンパク質共役受容体GPR61のN末端による恒常的活性化の検証

G蛋白偶联受体GPR61 N端组成型激活的验证

• 发表时间: 2007
• 作者: 豊岡勝;武田茂樹
• 通讯作者: 武田茂樹

Structural modeling and mutation analysis of a nociceptin receptor and its ligand complexes

伤害感受素受体及其配体复合物的结构建模和突变分析

• 期刊: J.Biochem. (In press)
• 作者: N. Akuzawa;S. Takeda;M. Ishiguro;N.Akuzawa et al.;N.Akuzawa et al.
• 通讯作者: N.Akuzawa et al.

5-oxo-ETE受容体を活性化するペプチドとその誘導体

激活5-oxo-ETE受体的肽及其衍生物

• 发表时间: 2008

Structural modeling and mutation analysis of a nociceptin receptor and its ligand complexes.

伤害感受素受体及其配体复合物的结构建模和突变分析。

• 发表时间: 2007
• 期刊: J. Biochem. (Tokyo) 141
• 作者: N. Akuzawa;S. Takeda;M. Ishiguro
• 通讯作者: M. Ishiguro

バクテリオファージMu基盤サブユニットgp45の精製と解析

噬菌体 Mu 亚基 gp45 的纯化和分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 鈴木栄貴;武田茂樹
• 通讯作者: 武田茂樹