Physiological and functional analysis of a family of tetracycline transporter-like proteins in Arabidopsis
拟南芥四环素转运蛋白家族的生理和功能分析
基本信息
- 批准号:41120332
- 负责人:
- 金额:--
- 依托单位:
- 依托单位国家:德国
- 项目类别:Research Grants
- 财政年份:2007
- 资助国家:德国
- 起止时间:2006-12-31 至 2009-12-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
During transcriptome analyses of the vascular tissue of Plantago major the cDNA of a tetracycline transporter-like (Tet-TP-like) protein has been identified. Quantitative RT-PCRs revealed that this gene is specifically expressed in the vasculature of Plantago major. Arabidopsis possesses a small family of three Tet-TP-like genes that are located next to each other on chromosome II (At2g16970, At2g16980, At2g16990) and a fourth, only distantly related and much smaller gene on chromosome V (At5g42210). The promoter of At2g16970, the gene most closely related to the Tet-TP-like gene from Plantago drives expression of the GUS-reporter gene with high specificity also only in the vasculature of Arabidopsis thaliana. A homozygous At2g16970 k.o.-line that carries T-DNA insertion in its 1st exon shows a severe phenotype that results in tiny rosettes that to not produce fertile seeds. In this project we aim to characterize the family of Tet-TP-like proteins of Arabidopsis thaliana and the Tet-TP-like protein from Plantago major. We will generate and analyze inducible amiRNA-lines, over-expressors of Tet-TP-like genes and promoter- GUS/GFP lines and will analyze these plants for macroscopic, microscopic and metabolite phenotypes. Moreover, we will generate specific antisera against the different Tet-TP-like proteins and perform transient expression analyses with GFPtagged cDNAs to determine the cell-specific and subcellular localization. Functional analyses will be performed in different heterologous expression systems (yeast and Xenopus).
在大车前维管组织的转录组分析过程中,已经鉴定了四环素转运蛋白样(Tet-TP-like)蛋白的cDNA。定量RT-PCR结果表明,该基因在车前草的脉管系统中特异表达。拟南芥拥有一个小家族的三个Tet-TP-like基因,位于染色体II上彼此相邻(At 2g 16970,At 2g 16980,At 2g 16990)和第四个,只有远亲和更小的基因在染色体V上(At 5g 42210)。At 2g 16970的启动子,与来自车前的Tet-TP-like基因最密切相关的基因,也仅在拟南芥的脉管系统中以高特异性驱动GUS报告基因的表达。纯合子At 2g 16970 k.o.-在其第一个外显子中携带T-DNA插入的品系显示出严重的表型,其导致不能产生可育种子的微小轮状体。本研究的目的是对拟南芥Tet-TP-like蛋白家族和车前草Tet-TP-like蛋白进行研究。我们将产生和分析诱导amiRNA系,Tet-TP样基因的过表达子和启动子- GUS/GFP系,并将分析这些植物的宏观,微观和代谢物表型。此外,我们将产生针对不同Tet-TP样蛋白的特异性抗血清,并使用GFP标记的cDNA进行瞬时表达分析,以确定细胞特异性和亚细胞定位。将在不同的异源表达系统(酵母和非洲爪蟾)中进行功能分析。
项目成果
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