in vivoイメージングによるSARS-CoV-2治療薬の評価系の確立

利用体内成像建立 SARS-CoV-2 疗法的评估系统

• 批准号: 22K06073
• 负责人: 浅賀 正充
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06073/
• 关键词: SARS-CoV-2; リバースジェネティクス

世界的なパンデミックを引き起こした新型コロナウイルス感染症は、全世界で非常に大きな問題として喫緊な対策が求められている。SARS-CoV-2の治療薬開発では動物での薬効評価が必須であるが、時間がかかるため早急な治療薬の開発にはより簡便で迅速な動物感染モデルでの薬剤評価系が必要不可欠である。本申請研究では、in vivoイメージングによりSARS-CoV-2感染マウスを非侵襲的に観察し、中和抗体薬や抗ウイルス治療薬の検討を迅速に行う系の確立を目的とする。本年度は、化学発光遺伝子を組み込んだ組換えSARS-CoV-2の作成を行った。このウイルスは、ウイルスの遺伝子の一部を欠損させる代わりに、化学発光遺伝子を組み込んだウイルスであり、ウイルス感染したマウスに基質を投与することで感染組織で化学発光が起こる。化学発光遺伝子としてAkaLuc遺伝子を挿入したウイルス（rSARS-CoV-2-AkaLuc）の作成を試みた。その結果、AkaLuc遺伝子を挿入した組換えウイルスは増殖しないことが判明した。その原因の1つとして、欠損させるウイルス遺伝子よりも挿入する化学発光遺伝子AkaLucが大きいため、ウイルスゲノムが粒子内にうまくパッケージングされない可能性があることが挙げられる。そこで我々は、AkaLucよりも遺伝子サイズの小さいteLucを挿入した組換えSARS-CoV-2（rSARS-CoV-2-teLuc）を作成することとした。現在rSARS-CoV-2-teLucの作成に成功しており、野生型のウイルスと同程度の増殖速度であることが分かった。今後rSARS-CoV-2-teLucを用いて、マウス生体内での化学発光の検出を試みる予定である。

导致全球大流行的Covid-19是世界上一个巨大的问题，被要求采取紧急措施。对动物疗效的评估对于开发SARS-COV-2的治疗药物至关重要，但是随着时间的流逝，动物感染模型中更方便，更快的药物评估系统对于开发紧急治疗药物至关重要。这项申请研究旨在建立一个系统，在该系统中，通过体内成像观察到SARS-COV-2感染的小鼠，并迅速研究中和中和抗体药物和抗病毒疗法。今年，我们创建了结合化学发光基因的重组SARS-COV-2。该病毒没有删除某些病毒的基因，而是结合了化学发光基因，当将底物施用对感染的病毒感染的小鼠时，在感染的组织中发生化学发光。我们试图创建一种病毒（RSARS-COV-2-AKALUC），其中Akaluc基因被插入化学发光基因。结果，发现插入Akaluc基因的重组病毒没有增殖。原因之一是病毒基因组可能无法很好地包装在颗粒中，因为插入的化学发光基因比缺失的病毒基因更大。因此，我们决定使用Teluc创建重组SARS-COV-2（RSARS-COV-2-TELUC），其基因大小比Akaluc较小。 RSARS-COV-2-TELUC的产生现已成功地进行，并且发现它的速度与野生型病毒相似。我们计划尝试使用体内RSARS-COV-2-TELUC检测小鼠的化学发光。