モラクセラ・カタラーリスの薬剤耐性に関わる外膜タンパク質の解析

卡他莫拉菌耐药性相关外膜蛋白分析

• 批准号: 17H00646
• 负责人: 山田 景士
• 金额: $ 0.28万
• 依托单位: 東京都保健医療公社豊島病院
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00646/
• 关键词: モラクセラ・カタラーリス; 外膜タンパク質; 抗菌薬耐性

【背景および目的】モラクセラ・カタラーリス(Moraxella catarrhalis)は呼吸器感染症の主要起炎菌として広く認識されている。一方でグラム陰性菌の薬剤耐性因子として外膜タンパク質(Outer membrane protein : OMP)の発現量減少が知られている。これまでの研究で大腸菌や緑膿菌ではOMPと各種抗菌薬耐性の関連は研究され報告されているが、M. catarrhalisのOMPと薬剤耐性に関する報告は少ないことから本研究では、M. catarrhalisのOMP欠損株を作製し、OMP欠損が薬剤耐性に与える影響を調べた。【材料と方法】菌株としてATCC49143株を使用し、外膜タンパク質を調整した。調整した外膜タンパク質をSDS-PAGEで分離し、35-50kDa付近のタンパク質を質量分析装置によるペプチド・マスフィンガープリンティングで同定した。その中で、ポーリンタンパク質と同定された3種類のタンパク質(M35, M45(仮称), OmpE)について、アミノ酸翻訳領域内にトランスポゾンを挿入した標的タンパク質ノックアウト株を作製した(ΔM35, ΔM45, ΔOmpE)。それぞれの菌株について、キノロン系抗菌薬であるlevofloxacinとciprofloxacinの最小発育阻止濃度を微量液体希釈法で測定した。【結果】作製したノックアウト株3株はいずれもPCRで標的遺伝子の野生型消失およびSDS-PAGEで目的タンパク質の消失が確認された。ΔM35, ΔM45, ΔOmpEのlevofloxacinおよびciprofloxacinの最小発育阻止濃度は野生株と比較し、ΔM35で2管上昇, ΔM45で1管上昇, ΔOmpEでは変化しなかった。【考察】本研究により、M35およびM45は軽度ではあるがキノロン系抗菌薬の耐性に関与し、OmpEはキノロン耐性に関与しない可能性が示唆された。今後は対象抗菌薬を増やし検討を継続していく予定である。

[Background] Moraxella catarrhalis is a major cause of respiratory infections. The decrease in the production of Outer membrane protein (OMP) was observed in one group of negative bacteria. The relationship between resistance of Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa to OMP and various antimicrobial agents was studied in this paper. OMP tolerance of catarrhalis is reported in this study. Catarrhalis 'OMP deficiency is controlled, and OMP deficiency is regulated by its resistance and influence. [Material and method] Strain ATCC49143 was used and its outer membrane was adjusted. SDS-PAGE was used to adjust the separation of the outer membrane and the separation of the 35-50kDa outer membrane. The three types of species (M35, M45(name), OmpE) are classified into three categories: species (M35, M45(name), OmpE) and species (ΔM35, ΔM45, ΔOmpE). The minimum growth inhibition concentration of levofloxacin and ciprofloxacin was determined by micro-liquid method. [Results] 3 strains of the strain were identified by PCR and SDS-PAGE.ΔM35, ΔM45, ΔOmpE levofloxacin and ciprofloxacin minimum growth-inhibiting concentrations increased with increasing ΔM35, increasing ΔM45 and decreasing ΔOmpE. [Investigation] In this study, the resistance of M35 and M45 to antimicrobial agents was investigated, and the resistance of OmpE to antimicrobial agents was investigated. In the future, the anti-bacterial agent will be discussed in detail.

项目成果

Molecular Characterization of Fluoroquinolone-Resistant Moraxella catarrhalis Variants Generated In Vitro by Stepwise Selection

通过逐步选择体外产生的耐氟喹诺酮类卡他莫拉菌变种的分子表征

• DOI: 10.1128/aac.01336-17
• 发表时间: 2017
• 期刊: Antimicrobial Agents and Chemotherapy
• 影响因子: 4.9
• 作者: Yamada Kageto;Saito Ryoichi;Muto Saori;Kashiwa Machiko;Tamamori Yoshiko;Fujisaki Shingo
• 通讯作者: Fujisaki Shingo