血小板および顆粒球抗原・抗体検査システムの確立

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(目的)血小板特異抗原(HPA:Human platelet antigen)対する同種抗体は、血小板輸血時の副作用である血小板輸血不応(PTR:Platelet transfusion refractoriness)や重篤な新生児血小板減少症(NAIT:Neonatal alloimmune thrombocytopenia)の原因となることが知られている。抗血小板抗体の検査法として、MAIPA(Monoclonal antibody specific immobilization of platelet antigens)法が欧米で汎用されており、本邦ではMPHA(Mixed passive hemaggltination)法が広く用いられているが、これらの検出感度、特異性の比較検討はなされていない。MPHA法は感度の高い方法として知られているが、本邦で確認されているNAIT症例の約半数で原因抗体が検出できていない状況である。そこで、本研究ではMPHA法、MAIPA法の検出感度、特異性を比較検討し、それぞれの検出感度・特異性を向上させるための条件を決定、さらにはこれらに遺伝子検査などを組み合わせて、より確実な血小板抗原・抗体系の検査法を確立することを目的とした。(方法)1)HPA型genotyping:末梢血白血球からgenomic DNAを抽出し、アリル特異的プライマーによりPCR増幅し、PHFA(Preferential homoduplex formation assy)およびSSO(Sequence specific primers)法を用いて血小板特異抗原(HPA型)を同定した。2)MPHA法、MAIPA法の条件設定:抗体同定の検出感度、特異度を向上するために反応時間、試薬などの条件設定をおこなった。3)MPHA法、MAIPA法の比較検討:2)で設定した条件の下、MPHA法、MAIPA法の比較検討をおこない、HPA型毎の抗体同定感度や特異性、またそれぞれの長所と短所を明らかにした。(成果)MPHA法を一部条件変更することにより、従来のMPHA法で検出不可能であった抗HPA-15抗体を高感度に検出可能とした。またMAIPA法を導入し、詳細な条件設定をおこない、より安定で確実な検査法に改良した。そこで、それぞれのHPA抗原について、MPHA法とMAIPA法の検出感度や特異性の比較検討をおこなった。その結果、HPA型毎に両方法間の検出感度、特異性が異なることが明らかとなった。本結果より、PTRやNAIT症例で原因抗体が一つの検査法で同定できない症例に対しては、検査方法を併用することによって検出率を向上させることが可能と考えた。今後、それぞれの方法における各HPA型の検出条件を決定していく予定である。また、何れの方法でも検出困難な抗血小板抗体に関しては、新たな方法の開発も考慮し、検討していく予定である。