新生児血小板減少症および輸血関連急性肺障害発症機序の解明

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(研究目的)血小板特異抗原(HPA; Human platelet antigen)に対する同種抗体は、新生児血小板減少症(NAIT; Neonatal al loimmune thrombocytopenia)の原因となることが知られている。抗血小板抗体検査法として、本邦ではMPHA(Mixed passive hemagglutination)法が広く用いられているが、NAIT症例の約半数で原因抗体が検出されていない。一方、MAIPA(Monoclonal antibody specific immobilization of platelet antigens)法を主に実施している欧米においては、その原因抗体非検出率は約2-3割とされ、何れも遺伝子頻度から推定される抗体検出率とは異なる結果であり、それぞれの検査法の特異度及び感度の違いに起因するものと考えられる。一方、輸血関連急性肺障害(TRALI; transfusion-related acute lung injury)は、非心原性の急性肺水腫による呼吸困難を主徴とし、輸血関連死の3番目に多い死因とされている重篤な輸血副作用であり、その発症機序を解明することが必要不可欠と考えられる。TRALIの発症には、白血球抗体(HLA抗体、HNA (human neutrophil antigen)抗体)が重要な役割を果たしているとされおり、白血球抗体が白血球に結合することによって様々なサイトカイン等が放出され、これらが血管内皮細胞を傷害するという説があるが、その機序については十分解明されていない。本研究では、これらの同種抗体のNAIT及びTRALI発生への関与を明らかにすることを目的とした。計画)NAITについての検討1.抗血小板抗体検査法の比較検討:MPHA法とMAIPA法の抗体同定の検出感度、特異度の向上を目指して反応時間、試薬などの詳細な条件設定をおこなった。この条件の下、二法の比較検討を行い、HPA型毎の抗体検出感度や特異度、またそれぞれの方法の長所と短所を明らかにした。2.NAIT症例の検討:当院のNAIT疑い例、類似症例について、臨床像、経過などについて解析し、母親血清を用いて、レトロスペクティブにHPA抗体およびHLA抗体の検出、同定をおこなった。TRALIについての検討血管内皮細胞傷害活性:蛍光染色した臍帯静脈血管内皮細胞(HUVECs)を96wellプレートに培養し、白血球抗体により活性化した白血球を添加し、数時間のインキュベーションの後、生細胞の蛍光を測定し、死細胞の割合を算出し、血管内皮細胞傷害活性を求めた。結果)MPHA法及びMAIPA法の詳細な条件設定をおこない、より安定で確実な検査方法に改良した。そこで、各HPA抗体について、二法の検出感度及び特異度の比較検討をおこなった結果、HPA型毎に二方法間の検出感度や特異度が異なることが明らかとなった。また、原因抗体非検出NAIT症例について、上記の方法を用いてレトロスペクティブに再検査を実施した結果、新たにHPA抗体が検出された。現状では、単一の検査方法を用いて、全ての臨床的意義のある血小板同種抗体を検出することは不可能であることがわかった。また血管内皮細胞傷害試験において、HNA抗体と反応した白血球がLPS活性化内皮細胞を傷害することが確認された。これまでの検討では、HLA抗体による影響は確認できていないが、更に検討を加えていく予定である。