遺伝子導入細胞を用いた抗血小板および抗顆粒球抗体検出法の改良・開発

使用基因转移细胞的抗血小板和抗粒细胞抗体检测方法的改进和发展

• 批准号: 26931041
• 负责人: 松橋 美佳
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26931041/
• 关键词: HPA; HNA; 遺伝子導入細胞

(目的)血小板特異抗原(HPA, Human platelet antigen)に対する同種抗体は、新生児血小板減少症や血小板輸血不応の原因となる。また、顆粒球抗原(HNA, Human neutrophil antigen)に対する同種抗体は重篤な輸血副作用である輸血関連急性肺障害の発症に関与する。そのため、これらの抗体を確実に検出することが、病態を診断し、適切な予防・治療策を講じる上で必要不可欠である。現在、種々のHPAおよびHNA抗体検査法が存在するが、何れも末梢血より分離した血小板・顆粒球を必要とし、また被検血清中に共存する他の同種抗体(抗HLA抗体、抗A、抗B抗体など)の影響により、目的とするHPAおよびHNA抗体の特異性判定が困難となることがある。本研究では、上記の問題の解決を目指し、目的のHPA・HNA抗原のみを強発現する安定な遺伝子導入細胞を用いた抗体検査法の確立を目的とした。(計画)1) 遺伝子導入に用いる親株の選択2) 遺伝子導入ベクターの作製3) HPAおよびHNA遺伝子導入細胞の作製4) HPAおよびHNA抗体検出方法の条件設定(成果)数種のヒト正常血清と数種の白血病細胞との反応性をフローサイトメトリー法により確認し、非特異反応の低い細胞株1種を親株に選択した。また、日本人に重要とされる抗原系であるHPA-4, -6, -15, CD36に加え、欧米人で重要とされるHPA-1の遺伝子導入ベクターを作製することが出来た。現在、このベクターを用いて遺伝子導入用組換えウイルスを作製し、HPA遺伝子導入細胞を作製している最中である。さらに、HPA抗体検出法に関しては、すでに作製済みの遺伝子導入細胞を用いて細胞数や血清感作量などの詳細な検討を実施し、条件設定をおこなった。今後、HNA遺伝子導入細胞も同様に作製していく予定である。

Objective: To investigate the role of alloantibodies against Human platelet antigen (HPA) in neonatal thrombocytopenia and platelet transfusion failure. Human neutrophil antigen (HNA) is associated with the development of transfusion-associated acute lung injury. It is necessary to accurately detect, diagnose, prevent and treat the disease. Currently, there are no specific HPA and HNA antibody tests, no need to separate platelets and granulocytes from peripheral blood, and the influence of other allogeneic antibodies (anti-HLA antibodies, anti-A, and anti-B antibodies) coexisting in the subject's serum. Therefore, it is difficult to determine the specificity of HPA and HNA antibodies for both purposes. The aim of this study is to solve the above problems and to establish an antibody assay for the strong detection of HPA and HNA antigens and for the stable introduction of HPA into cells. (Project)1) Selection of parent strains for gene introduction 2) Operation of gene introduction 3) Operation of HPA and HNA gene introduction cells 4) Condition setting of HPA and HNA antibody detection method (Results) Identification of several normal serum and several leukemia cell lines with anti-HPA and non-specific anti-HNA antibodies 1 parent strain. HPA-4, -6, -15, CD36 and HPA-1 are important antigens for Japanese and Europeans. Now, the most important thing is to use the gene introduction system to control HPA gene introduction into cells. In addition, the HPA antibody detection method is related to the preparation and introduction of DNA into cells, the number of cells, the amount of serum, and the detailed implementation of conditions. In the future, HNA gene transfer into cells will be controlled in the same way.