トランスフェクタント細胞を用いた抗血小板および抗顆粒球抗体検査法の確立

利用转染细胞建立抗血小板和抗粒细胞抗体检测方法

• 批准号: 25931045
• 负责人: 松橋 美佳
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25931045/
• 关键词: HPA; HNA; トランスフェクタント細胞

(目的)血小板特異抗原(HP A ; Human platelet antigen)に対する同種抗体は、血小板輸血不応や新生児血小板減少症などの原因となる。一方、顆粒球抗原(HNA、Human neutrophil antigen)に対する同種抗体は重篤な輸血副作用である輸血関連急性肺障害の発症に関与することから、HPA及びHNA抗体の検出は、これらの病態の診断・予防に不可欠である。現在、様々なHPA・HNA抗体検査法があるが、いずれもボランティアドナーから採取した新鮮な血小板または顆粒球を必要とするという短所を有す。また、被検血清中に共存する他の同種抗体(HLA抗体など)の影響により、抗体特異性判定が困難のこともある。本研究では、上記問題の解決を目指し、目的の抗原のみを強発現する安定なトランスフェクタント細胞を用いた抗体検査法の確立を目的とした。(計画)1)ヒト正常血清との非特異反応の低いヒト白血病細胞株(親株)を選択する。2)ボランティアドナー全血より目的のHPA及びHNA型のRNAを抽出し、cDNAを作製する。このcDNAから各種HPA及びHNAのcDNAをRT-PCRで増幅し、プラスミドにクローニングする。塩基配列を確認後、レトロウイルスベクターにのせかえる。3)パッケージング細胞に上記のHPAおよびHNA発現レトロウイルスベクターを導入し、レトロウイルスを作製する。このウイルスを1)で選択した細胞に感染させ、目的のHPA及びHNA導入細胞とする。4)HPAまたはHNA高発現細胞株に抗体特異性既知血清を反応させ、抗体検出方法の条件設定を行う。(成果)数種の白血病細胞とヒト正常血清との反応性を確認し、非特異反応の低いパネル細胞株1種を選択した。また、数種(HPA-1、-4、-6、-15、CD36)のHPA遺伝子導入ベクターを作製することが出来た。今後、このベクターから遺伝子導入用組み換えウイルスを作製し、HPA遺伝子導入細胞を作製する予定である。その後、全てのHPA型及びHNA型の遺伝子導入細胞作製していく予定である。

(objective) Platelet specific antigen (HP A; Human platelet antigen) was used to detect the same antibody and thrombocytopenia in neonatal thrombocytopenia. On the one hand, granule antigens (HNA, Human neutrophil antigen) were tested against the same antibodies, blood side effects, acute lung disease, acute lung disease, HPA and HNA antibodies were detected, and the symptoms of disease were prevented. Now, the HPA ·HNA antibody method is used to determine whether it is necessary to have a new platelet, platelet, granule, etc. The co-existence of the same antibody (HLA antibody antibody) in the sera and sera of the infected mice showed that the specificity of the antibodies was not detectable. In this study, antibody antibody method was used to determine the target of the target and the antigen of the target in this study. (plan) 1) select the cell line (cell line) of low-risk leukemia in the presence of normal serum. 2) the whole blood sample was extracted from HPA and HNA RNA, and cDNA was extracted from the whole blood. Please check all kinds of HPA and HNA cDNA RT-PCR format for each kind of RT-PCR, and make sure that you need to improve your performance. After the configuration of the base is correct, you will need to know how to make sure that you do not know how to use it. 3) on the HPA cell, you can see that you don't know what's going to happen, and you're going to have to do something. (1) Select the number of infected cells, the purpose of HPA and HNA into the cell. 4) it is known that the antibody specificity of the cell line with high level of HPA antibody HNA is known, and the condition setting of the antibody detection method is feasible. (results) several leukemic cell lines were confirmed for normal serum reactivity and selected for non-specific anti-leukemic cell strain 1. Several kinds of (HPA-1,-4,-6,-15, CD36) HPA spools are imported into the container to make sure that they are exported. From now on, you will need to know that the user will be able to use the computer, and the HPA will be put into the cell to make the predetermined decision. After treatment, the HPA type and HNA type were transferred into the cell to make a predetermined dose.