血小板および顆粒球抗原・抗体検査法の改良・開発とその応用

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(目的)血小板特異抗原(HPA ; Human platelet antigen)に対する同種抗体は、新生児血小板減少症(NAIT ; Neonatal alloimmune thrombocytopenia)の原因となることが知られている。抗血小板抗体検査法として、本邦ではMPHA(Mixed passive hemaggltination)法が広く用いられているが、NAIT症例の約半数で原因抗体が検出されていない。一方、欧米では、MAIPA(Monoclonal antibody specific immobilization of platelet antigens)法が広く実施されているが、NAIT症例における原因抗体非検出率は約2-3割とされており、検査法の開発や改良が必要であると考えられる。近年、欧米で検出されている抗HPA-15抗体について、遺伝子頻度から推測すると、本邦においてもNAITの発症に関係している可能性があるが、未だ検出はされていない。さらに、その他の抗原についても遺伝子頻度から推定される検出率とは異なっており、それぞれの検査法の特異度及び感度の違いによるものと考えられる。そこで、本研究では血小板型の抗原・抗体検出システムの確立を目的とし、MPHA法、MAIPA法の確実な検出条件を決定すべく改良を加える。本研究により、NAITに関与する抗原・抗体系の検査を確立することを目的とした。(方法)1)MPHA法とMAIPA法の比較検討:それぞれの方法で、抗体同定の検出感度、特異度を向上するために反応時間、試薬などの詳細な条件設定をおこなった。この条件の下、二法の比較検討を行い、HPA型毎の抗体検出感度や特異度、またそれぞれの長所と短所を明らかにした。2)原因抗体非検出NAIT症例の解析:これまで検出不能であった抗HPA抗体保有疑い患者血清90例を用いて、1)で検討した方法を実施して原因抗体の検出を試みた。(成果)MPHA法及びMAIPA法の詳細な条件設定をおこない、より安定で確実な検査方法に改良した。そこで、各HPA抗原について、二法の検出感度及び特異度の比較検討をおこなった。その結果、HPA型毎に二方法間の検出感度や特異度が異なることが明らかとなった。また、原因抗体非検出NAIT症例について、レトロスペクティブに再検査を実施した結果、本邦初の抗HPA-15抗体を検出した。現状では、単一の検査方法を用いて、全ての臨床的意義のある血小板同種抗体を検出することは不可能であることがわかった。それゆえに、それぞれの抗血小板抗体検査法の特徴を考慮し、状況に応じて、複数の検査方法を組み合わせることが重要であると考える。また、既存の検査法の改良や新たな検査法の開発も必要と考えられる。