内分泌かく乱物質投与によるマウス精巣の乳酸脱水素酵素アイソザイム形成過程の解明

阐明因施用内分泌干扰物而导致小鼠睾丸中乳酸脱氢酶同工酶形成的过程

• 批准号: 20929001
• 负责人: 鈴木 英明
• 金额: $ 0.37万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929001/
• 关键词: 乳酸脱水素酵素; 核因子I; 分子生物学

乳酸脱水素酵素(LDH)-xアイソザイムが組織特異的に機能する過程を解明するために、7週齢のBALB/c CrSlcマウスにn-butyl-p-hydroxybenzoate(BHB)を100mg/kg、25mg/kgおよび10mg/kgずつ6週間腹腔内投与する実験を試みた。対照はBHBの代わりにdimethyl sulfoxideを投与した。マウスは麻酔開腹後、直ちにDiethylpyrocarbonate処理したリン酸緩衝液(PBS)で還流し精巣を摘出、臓器重量当たりの精子数をカウントした。また、臓器はPBSで洗浄し-80℃で保存した。LDH-xアイソザイム分画はベロナール緩衝液を用いて電気泳動後、LDH活性染色を行った。LDH-xを形成する遺伝子LDH-CのmRNA発現量は、抽出したmRNAからcDNAを合成後、β-Actin遺伝子を内部標準遺伝子とする半定量的PCR法で解析した。核抽出物を抗各転写因子(NF I)抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した。その結果、BHBの精子形成抑制に従い、LDH-xアイソザイム分画比は減少傾向であった。また、BHB投与によるLDH-CのmRNA発現量に優位な差は認められなかった。さらに、LDH-xアイソザイムの形成に関与する転写翻訳因子を特定するために、抗NF I抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した結果、BHB投与量が増加するに従い、NF Iがやや増加する傾向がみられた。これらのことから、BHBは核内NF I量を増加させる作用をもち、さらにNF-I増加によりLDH-C遺伝子発現が抑制された結果、LDH-Cアイソザイム量が減少したと推測する。今回、LDH-Cアイソザイム発現因子の一部が明らかになったことは、LDH-xアイソザイム研究として有意義である。

Lactate dehydrase (LDH)-xアイソザイムがTissue-specific function and process of explanation and explanation, 7 weeks of BALB/c CrSlcマウスにn-butyl-p-hydroxybenzoate (BHB) was administered intraperitoneally at 100 mg/kg, 25 mg/kg, and 10 mg/kg for 6 weeks.対光はBHBの代わりにdimethyl sulfoxideをinvest and した. After laparotomy, the spermatozoa should be extracted with Diethylpyrrocarbonate treatment and the flow of acid buffered solution (PBS), and the sperm count should be determined according to the weight of the organ. The container should be washed with PBS and stored at -80℃. After the LDH-x アイソザイムseparation buffer was electrophoresed using いて electrophoresis, LDH activity staining was carried out. LDH-x was formed and the LDH-C mRNA was present, the mRNA was extracted and cDNA was synthesized, and β-Actin was synthesized and the internal standard was analyzed using a semi-quantitative PCR method. Nuclear extracts and antibodies against each factor (NF I) were analyzed using the Biotech Biotechnology Co., Ltd. method. The result, BHB's sperm formation inhibition, and LDH-x's separation ratio tend to decrease.また, BHB injection and によるLDH-C のmRNA present quantity and superiority and difference められなかった.さらに, LDH-x アイソザイムの成に关 and する転写訳訳factor をspecific するために, anti-NF The results of I antibody analysis using the いたウェスタンブロット method, the BHB dosage increased, and NF I have a tendency to increase my love.これらのことから、BHBは内NF I increase the amount of させる effect をもち, さらにNF-I increase the amount of によりLDH-C 缝子The result of suppressing the appearance of the disease and the reduction of the amount of LDH-C are speculated. This time, LDH-C アイソザイムappearance factor の明らかになったことは, LDH-x アイソザイム research として is meaningful.

项目成果

ブチルパラベン誘導体投与によるマウス清掃乳酸脱水素酵素アイソザイムの変化

给予对羟基苯甲酸丁酯衍生物对小鼠清除乳酸脱氢酶同工酶的变化

• 发表时间: 2008
• 作者: Hidaka N;Li B;Suemaru K;Araki H;飛鷹範明;山下梨沙子;鈴木英明
• 通讯作者: 鈴木英明