内分泌かく乱物質投与によるマウス精巣の乳酸脱水素酵素アイソザイム形成過程の解明

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乳酸脱水素酵素(LDH)-xアイソザイムが組織特異的に機能する過程を解明するために、7週齢のBALB/c CrSlcマウスにn-butyl-p-hydroxybenzoate(BHB)を100mg/kg、25mg/kgおよび10mg/kgずつ6週間腹腔内投与する実験を試みた。対照はBHBの代わりにdimethyl sulfoxideを投与した。マウスは麻酔開腹後、直ちにDiethylpyrocarbonate処理したリン酸緩衝液(PBS)で還流し精巣を摘出、臓器重量当たりの精子数をカウントした。また、臓器はPBSで洗浄し-80℃で保存した。LDH-xアイソザイム分画はベロナール緩衝液を用いて電気泳動後、LDH活性染色を行った。LDH-xを形成する遺伝子LDH-CのmRNA発現量は、抽出したmRNAからcDNAを合成後、β-Actin遺伝子を内部標準遺伝子とする半定量的PCR法で解析した。核抽出物を抗各転写因子(NF I)抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した。その結果、BHBの精子形成抑制に従い、LDH-xアイソザイム分画比は減少傾向であった。また、BHB投与によるLDH-CのmRNA発現量に優位な差は認められなかった。さらに、LDH-xアイソザイムの形成に関与する転写翻訳因子を特定するために、抗NF I抗体を用いたウェスタンブロット法により解析した結果、BHB投与量が増加するに従い、NF Iがやや増加する傾向がみられた。これらのことから、BHBは核内NF I量を増加させる作用をもち、さらにNF-I増加によりLDH-C遺伝子発現が抑制された結果、LDH-Cアイソザイム量が減少したと推測する。今回、LDH-Cアイソザイム発現因子の一部が明らかになったことは、LDH-xアイソザイム研究として有意義である。