脳の発生異常をウィルムス腫瘍を合併する有系分裂異常症の病態解析と原因遺伝子の同定

脑发育异常伴肾母细胞瘤有丝分裂紊乱致病基因的病理分析及鉴定

• 批准号: 11877134
• 负责人: 鈴木 英明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877134/
• 关键词: 紡錘糸チェックポイント; anaphase-promoting complex; Wilms腫瘍; Dandy-Walker奇形; 紡錘糸チェックポイント(MSC); anaphase-promoting complex(APC); ユビキチン・リガーゼ; Wilm's腫瘍

前年までの研究により、Dandy-Walker奇形を含む重度の脳奇形とWilms'腫瘍を合併する稀な先天奇形症候群において、紡錘糸チェックポイント機能が欠損していることを解明し、この症候群をmosaic variegaled aneuploidy type2(MVA type2)と命名した。本疾患の原因遺伝子を同定するために、本年度は、紡錘糸チェックポイント経路の既知蛋白(Mad2,Securin)の過剰発現実験を行った。方法はMad2-IRES-EGFP、Securin(PTTG1)-IRES-EGFPの2つのコンストラクトを持つレトロウィルスを作成し、患児細胞に感染させた後、GFP陽性細胞について紡錘糸形成阻害剤に対する反応を形態およびFACSを用い解析した。この結果Mad2およびSecurinどちらの蛋白を過剰発現させた場合でも、紡錘糸チェックポイント機能は回復することがわかった。このことから少なくとも本疾患の原因遺伝子はMad2より上流に存在する可能性が示唆された。この結果をもとに、Mad2より上流に位置すると考えられている既知の紡錘糸チェックポイント遺伝子の変異解析をSSCPおよびdirect sequence法を用いて行った。解析した遺伝子はMad1、Mad2、Mad3/BubR1、Bub1、Bub3、ZW10、Rough Deal(ROD)、CENP-Eである。しかしこれらの遺伝子には変異は認められなかった。

直到上一年的研究表明，主轴检查点功能在罕见的先天性畸形综合征中有缺陷，其中涉及严重的脑畸形，包括花花公子 - 步行者畸形和Wilms的肿瘤，并且该综合征被称为Mosaic variegaled variegaled aneuploidy aneuploidy type2（MVA type2）。为了鉴定该疾病的基因，我们在今年的主轴检查点途径中进行了已知蛋白（MAD2，Secuin）的过表达实验。该方法是创建一个带有两个MAD2-IRES-EGFP和SECERIN（PTTG1）-IRES-EGFP构建体的逆转录病毒，并在感染受影响的细胞后，使用形态学和FATS分析了GFP阳性细胞的纺锤体形成抑制剂的反应。该结果表明，当MAD2和Securin蛋白过表达时，纺锤纱检查点功能已恢复。这表明至少这种疾病的基因可能存在于MAD2的上游。基于这些结果，使用SSCP和直接序列方法对已知的纺锤纱检查点基因进行了突变分析。分析的基因是MAD1，MAD2，MAD3/BUBR1，BUB1，BUB3，ZW10，ROUD DEAL（ROD）和CENP-E。但是，在这些基因中未观察到突变。

项目成果

H.Suzuki,M.Akiyama,M.Tsukuno, et al.: "A novel Wilms' tumor-predisposing syndrome associated with the lack of metaphase checkpoint"Cancer Reserch. (in press).

H.Suzuki、M.Akiyama、M.Tsukuno 等人：“一种与缺乏中期检查点相关的新型维尔姆斯肿瘤诱发综合征”癌症研究。

Tsukuno M., Suzuki H., Eto Y.,: "Pfeiffer syndrome caused by haploinsufficiency mutation of FGFR2.J"Caniofac Genet Dev Biol. 19. 183-188 (1999)

Tsukuno M.、Suzuki H.、Eto Y.，：“由 FGFR2.J 单倍剂量不足突变引起的 Pfeiffer 综合征”Caniofac Genet Dev Biol。

Tsukuno M., Suzuki H., Eto Y.,: "Genomic structure of fibroblast growth factor receptor 2 ・・・"Jikeikai Med J. (in press). (2000)

Tsukuno M.、Suzuki H.、Eto Y.，：“成纤维细胞生长因子受体 2 的基因组结构……”Jikeikai Med J.（出版中）。