癌特異的転写後調節を利用した癌診断技術の開発

利用癌症特异性转录后调控开发癌症诊断技术

• 批准号: 21930008
• 负责人: 井手上 社子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21930008/
• 关键词: ピルビン酸キナーゼ; 選択的スプライシング; 可視化

[目的]最近、解糖系律速酵素のひとつであるピルビン酸キナーゼ(pyruvate kinase type-muscle 2 : PKM2)遺伝子の遺伝子発現が癌細胞の増殖に密接に関係していることが報告された(Christofk et al., Nature, 2008)。興味深いことに、PKM2遺伝子は2つのアイソフォームを選択的スプライシングによって産生し、正常組織ではエクソン9を含むPKM1、ほとんど全ての癌組織ではエクソン10を含むPKM2が選択されるようになる。申請者は、PKM2遺伝子の選択的スプライシングを生体内で可視化することにより、どの組織で細胞が癌化しているのかを容易に解析する技術を開発し、その技術の診断への応用を目指して研究を行った。[方法]本研究では、選択的スプライシングを可視化するために、スプライシングレポーターシステムを構築した。このレポーターは、PKM1を選択した場合には緑色蛍光タンパク質GFP、PKM2を選択した場合には赤色蛍光タンパク質RFPを発現する。レポーターは細胞にトランスフェクションし、蛍光顕微鏡による観察と、RT-PCR法によるRNAの解析を行い、内在性PKM遺伝子のスプライシングパターンと比較することでレポーターを最適化した。[研究成果]申請者は、C2C12細胞を用いてPKM2レポーターを評価した。C2C12細胞は分化誘導が可能なマウス筋芽細胞であり、未分化状態ではPKM2、分化状態ではPKM1を選択している。PKM2レポーターをC2C12細胞へ導入したところ、分化依存的にRFPからGFPへの切換えが見られた。このことから、PKM2レポーターは内在性PKM遺伝子のスプライシングを模擬し、細胞内のスプライシング反応を可視化できたと判断した。現在、個体レベルでシグナルを検出しやすくするためにRFP-GFPの代わりに高感度で生体内を透過しやすいCBRluc(クリックビートル由来赤色ルシフェラーゼ遺伝子)を挿入したPKM2レポーターを作製して評価を行っているところである。本研究で構築したシステムは、マウスやアフリカツメガエルといった個体レベルでの細胞の癌化、発生におけるスプライシング変化のライブイメージングに適応可能であり、さらには抗がん剤のスクリーニングやRNAiライブラリーを用いたスプライシング制御因子の探索にも応用できるため、今後の発展が期待される。

[objective] recently, the rapid glycolytic enzyme (pyruvate kinase type-muscle 2: PKM2) has been found to be closely linked with cancer cells (Christofk et al., Nature, 2008). [objective] recently, the rapid enzyme digestion system has been used to treat cancer cells. There is a deep taste in the body of the cancer tissue, which contains PKM1 in the normal tissue, PKM1 in the normal tissue, and PKM2 in the whole cancer tissue in which the PKM2 is selected. The applicants and the PKM2 candidates selected by the applicant and the applicant can be used in vivo. The tissue tissue cancerization is easy to analyze and analyze the technology and the technology. [methods] in this study, the selected and selected drugs can be used in this study. The colors are closed, the GFP is selected, the PKM2 is selected, and the red light is visible. The red light is visible in the PKM1. In this paper, we have to analyze the data of the RT-PCR method, the RNA method, the internal PKM method, the computer, the light, the light and the light. [research results] applicants and C2C12 cells use the word "PKM2". The differentiation of C2C12 cells may lead to the differentiation of muscle buds, undifferentiated cells, PKM2 and PKM1. PKM2 cells enter C2C12 cells, differentiate dependent RFP cells, GFP cells, and differentiate dependent cells. The endogenesis of the PKM is known to be caused by the presence of an internal PKM virus, and the intracellular response can be detected in the presence of an internal PKM virus. Now, in the case of high-sensitivity students, there is a significant increase in the number of high-sensitivity students in the body through the CBRluc (which is the cause of the disease). Now, in the case of the high-sensitivity students in the RFP-GFP generation, there is a significant increase in the number of high-sensitivity students in the system. Now, in the system, there is a significant increase in the number of high-sensitivity students in the body through the CBRluc (which is the cause of the disease). Now, in the system, you can enter the PKM2 system. The purpose of this study is to detect the possibility of carcinogenesis, anti-cancer, anti-tumor, anti-cancer, anti-cancer, In the future, the exhibition is looking forward to it.