肝細胞癌転移におけるファシンの役割解明と予後予測バイオマーカーとしての評価検討

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【研究目的】病理組織を用いて免疫組織化学的にファシンを検出し、分化度や浸潤度との関連を詳細に検討し、ファシンの検出が肝細胞癌症例の予後を推察するバイオマーカーになるのかを解析する。また、肝癌細胞の遊走・浸潤能に与えるファシンタンパクの機能およびそのメカニズムを分子生物学的手法により解析する。【研究方法】1.ヒト肝癌組織のファシンタンパク発現と肝癌の浸潤度との関連性についての病理学的検討当大学附属病院の過去症例の肝針生検標本および手術摘出肝癌組織を材料として、ファシンタンパクを免疫組織化学法により検出し、その発現と脈管浸潤や転移について病理学的に検討。2.肝癌細胞株のファシン発現とその機能の解析ヒト肝癌細胞株(HLE、HLF、Hep3B、HePG2)の発現を調べ、遺伝子導入により、低発現株には、ファシンの強制発現、高発現株はファシンのノックダウンを行い、細胞増殖、細胞遊走・浸潤能について各アッセイ法を用いて解析する。また、細胞形態をアクチン染色および電子顕微鏡で観察する。3.遺伝子導入肝癌細胞のヌードマウスへの細胞移植実験遺伝子導入肝癌細胞をヌードマウスに移植し、腫瘍形成、転移能および転移様式について検討する。【結果および考察】肝生検材料では、ファシンの発現は限局的で、陽性症例はほとんど認められず、外科材料では、低分化および一部の中分化肝癌に陽性症例が認められ、分化度と陽性率に相関があった。また、ファシン陽性肝癌細胞は、E-cadherinの発現の消失が観察された。低分化・ファシン高発現HLE肝癌細胞株のファシンをノックダウンすると遊走・浸潤能が著明に低下した。一方、ファシンを強発現させた高分化・ファシン低発現株Huh-7の遊走能は亢進したが、浸潤能に著変は見られなかった。そこで、HLEとHuh-7の培養上清をザイモグラフィ法で比較検討したところ、プロナーゼであるMMP-2、9産生の有無が浸潤能に大きく関与している事が判明した。ヌードマウスへの移植実験は、増殖能および遊走能の高いHLE肝癌細胞のを皮下移植を試みたが、生着せず腫瘍形成マウスを作製できなかった。結果をまとめると、肝生検の肝癌部でのファシンの検出は困難であったが、ファシンは遊走能に主要な働きをするとともに、MMPと共同して浸潤能の亢進機能を有することがわかり、予後を推察するマーカーとなりえることが示唆された。