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ラット胚由来肝芽細胞の初代培養系を用いた癌細胞遊走制御を目的とした基礎的研究

旨在利用大鼠胚胎成肝细胞原代培养系统控制癌细胞迁移的基础研究

基本信息

批准号：
20929023
负责人：
林芳弘
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929023/
关键词：
ラット肝芽細胞細胞遊走初代培養

项目摘要

1. 目的ラットの初期肝発生は、前腸内胚葉より突出した肝原基が基底膜を破壊し、横中隔間葉組織内に浸潤、増殖することから始まる。この過程は、ヒト癌細胞の浸潤・増殖・転移に類似したメカニズムが働くと推定される。申請者は、癌細胞の浸潤・転移に寄与するタンパクとしてfascin(actin-bundling protein)に注目し、肝発生初期の肝臓から肝芽細胞(未熟な肝細胞)を分離・培養する方法を確立し、fascinタンパクの発現と細胞外マトリックスなど他の因子との相互作用について検討した。2. 肝芽細胞の分離法の確立ラット胎齢13.5日胚より、実体顕微鏡下、肝臓を摘出し、メスで細切、ディスパーゼ(2.5mg/ml)に0.01%DNaseを加えた溶液内で消化処理(37℃、60分間)後、100μmのメッシュでろ過した。肝芽細胞の表面タンパクに対する抗体(抗E-cadherin抗体:200倍に希釈)を反応させた後、洗浄し、Microbeads標識anti-mouse抗体を作用させ、磁気細胞分離システム(MACS)を用いて、肝芽細胞を単離した。3. 培養肝芽細胞のfascinの発現生体内では、胎齢16.5日の肝芽細胞はfascinを発現していない。この観察結果より、胎齢13.5日肝より分離した肝芽細胞では、培養48時間後には、fascinの発現が消失すると予想した。分離後24時間後では、fascinの強い発現が認められたが、48時間後ではその発現が減退し、予想通りの結果が得られた。しかし、fibronectin-coat dish培養48時間後の観察では、fascinの発現低下はほとんど認められなかった。4. 微細構造観察形態的にfibronectin-coatとnon-coatの培養細胞を電顕観察すると、fibronectin-coat培養肝芽細胞は、細胞遊走に関与する細胞突起やアクチンファイバーが多く見られる傾向にあった。5. まとめ今回の研究により、肝芽細胞のfascin発現およびその発現変化にfibronectinが関与していることが明らかになった。このことより、fibronectinをligandとするintegrinやその下流に位置する細胞内情報伝達系および細胞内骨格系を制御することにより、癌細胞遊走・転移を抑制できることが示唆された。また、肝発生初期の肝芽細胞を用いた研究は、癌細胞の細胞遊走・転移機能を明らかにするための有用なツールとなることが証明された。

1. Objective to highlight the rupture of the basement membrane of the primary basement membrane of the liver, the immersion in the tissue of the transverse septum, and the initiation of the progenitor basement membrane of the liver in the early stage of pregnancy. The type of cell impregnation and transfer of cancer cells is similar to that of cancer cells. The method of isolation and culture of liver germ cells (immature liver cells) was established in the early stage of life, and the extracellular factors were detected in the early stage of life. Fascin (actin-bundling protein), immature liver germ cells (immature liver cells), liver germ cells (immature liver cells), hepatoma cells (immature liver cells), immature liver cells, immature liver cells two。 The method of hepatoblastoid cell sorting was used to make sure that the embryos of 13.5 days' embryo, micro-culture, extraction of liver tissue, cut-off, 2.5mg/ml-0.01%DNase plus digestion in the solution (37 ℃, 60 minutes), 100 μ m, 100 μ m, 100 μ m. After anti-E-cadherin antibody, washing, Microbeads-labeled anti-mouse antibody, magnetic cell isolation antibody (MACS), liver bud cell isolation, liver germ cell isolation. 3. The fascin cells of the liver germ were isolated from the living body, and the liver germ cells of the fetus of 16.5 days were detected by fascin. The results showed that the fetal liver cells were isolated for 13.5 days, the liver germ cells were isolated after 48 hours of culture, and the fascin was found to have disappeared. 24 hours after the break, fascin forced to check the number of hours after the clock, 48 hours after the clock to check out the results of the results were successful. After 48 hours of training and fibronectin-coat dish training, check the temperature, and fascin will find that the temperature is low. 4. Microphones are used in fibronectin-coat non-coat cell culture, fibronectin-coat culture, liver bud cell culture, cell migration and cell outgrowth. 5. This time, we are going to do some research, fascin, liver bud, liver bud, liver, liver The location of the indecent position, the intracellular information report, the intracellular bone system, the control and migration of cancer cells, the inhibition of migration, the inhibition of cell migration and the instillation of cancer cells. The location of the indecent position, the intracellular information report, the intracellular bone system, the control and migration of cancer cells. In the early stages of liver cancer, liver germ cells are used in the study of liver germ cells, and the cancer cell transfer machine can be used to show that it is useful to detect liver germ cells.