ラット胚由来肝芽細胞の初代培養系を用いた癌細胞遊走制御を目的とした基礎的研究

旨在利用大鼠胚胎成肝细胞原代培养系统控制癌细胞迁移的基础研究

基本信息

批准号：
20929023
负责人：
林芳弘
金额：
$ 0.36万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929023/
关键词：
ラット肝芽細胞細胞遊走初代培養

项目摘要

1. 目的ラットの初期肝発生は、前腸内胚葉より突出した肝原基が基底膜を破壊し、横中隔間葉組織内に浸潤、増殖することから始まる。この過程は、ヒト癌細胞の浸潤・増殖・転移に類似したメカニズムが働くと推定される。申請者は、癌細胞の浸潤・転移に寄与するタンパクとしてfascin(actin-bundling protein)に注目し、肝発生初期の肝臓から肝芽細胞(未熟な肝細胞)を分離・培養する方法を確立し、fascinタンパクの発現と細胞外マトリックスなど他の因子との相互作用について検討した。2. 肝芽細胞の分離法の確立ラット胎齢13.5日胚より、実体顕微鏡下、肝臓を摘出し、メスで細切、ディスパーゼ(2.5mg/ml)に0.01%DNaseを加えた溶液内で消化処理(37℃、60分間)後、100μmのメッシュでろ過した。肝芽細胞の表面タンパクに対する抗体(抗E-cadherin抗体:200倍に希釈)を反応させた後、洗浄し、Microbeads標識anti-mouse抗体を作用させ、磁気細胞分離システム(MACS)を用いて、肝芽細胞を単離した。3. 培養肝芽細胞のfascinの発現生体内では、胎齢16.5日の肝芽細胞はfascinを発現していない。この観察結果より、胎齢13.5日肝より分離した肝芽細胞では、培養48時間後には、fascinの発現が消失すると予想した。分離後24時間後では、fascinの強い発現が認められたが、48時間後ではその発現が減退し、予想通りの結果が得られた。しかし、fibronectin-coat dish培養48時間後の観察では、fascinの発現低下はほとんど認められなかった。4. 微細構造観察形態的にfibronectin-coatとnon-coatの培養細胞を電顕観察すると、fibronectin-coat培養肝芽細胞は、細胞遊走に関与する細胞突起やアクチンファイバーが多く見られる傾向にあった。5. まとめ今回の研究により、肝芽細胞のfascin発現およびその発現変化にfibronectinが関与していることが明らかになった。このことより、fibronectinをligandとするintegrinやその下流に位置する細胞内情報伝達系および細胞内骨格系を制御することにより、癌細胞遊走・転移を抑制できることが示唆された。また、肝発生初期の肝芽細胞を用いた研究は、癌細胞の細胞遊走・転移機能を明らかにするための有用なツールとなることが証明された。

1。目的：大鼠的初始肝发育开始时，当肝原基与前肢内胚层突出会破坏基底膜，侵入和增殖在横向中隔间隔间充质组织中。假定该过程具有类似于人类癌细胞的侵袭，增殖和转移的机制。申请人专注于fascin（肌动蛋白捆绑蛋白）是一种有助于癌细胞的浸润和转移的蛋白质，并建立了一种将肝母细胞（未成熟肝细胞）与肝脏发育早期分离和培养的方法与肝脏发育早期的肝脏，并与其他因素相互作用，并与其他因素相互作用。 2。建立一种分离肝细胞的方法，将肝脏从立体显微镜下从大鼠的胚胎中取出，用手术刀切成碎片，并用添加到配置酶的0.01％DNase（2.5 mg/ml）的溶液中消化，并通过100μmMesh过滤。与肝细胞表面蛋白（抗E-钙粘蛋白抗体：200次稀释）反应后，将细胞洗涤，经受过Microbeads标记的抗小鼠抗体的作用，并使用磁性细胞分离系统（MACS）分离了肝细胞。 3。在体内培养的肝细胞中fascin的表达，胎龄16.5天的肝细胞不表达fascin。基于这些观察结果，可以预测，在培养后的13.5天，在肝脏中分离出的肝细胞中，Fascin的表达将消失。分离后24小时观察到FASCIN的强表达，但在48小时时，其表达下降，从而预测结果。然而，当观察到纤连蛋白涂料培养基48小时后，Fascin的表达几乎没有降低。 4。在形态学上观察到纤连蛋白涂料和非涂料的细胞培养物时，微观结构观察，纤连蛋白涂层培养的肝细胞培养的肝细胞倾向于具有更多的细胞突起和参与细胞迁移的肌动蛋白纤维。 5。总结本研究表明，纤连蛋白参与FASTIN的表达及其在肝细胞中的表达变化。这表明可以通过控制纤连蛋白作为配体制成的整联蛋白，细胞内信号传导系统和位于其下游的细胞内骨骼系统来抑制癌细胞迁移和转移。此外，在肝发育的早期使用肝细胞进行研究已被证明是阐明癌细胞细胞迁移和转移功能的有用工具。