Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果の解析

蛋白水解酶抗原激活在Alport综合征免疫组化诊断中的作用分析

• 批准号: 22931015
• 负责人: 小見山 高明
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22931015/
• 关键词: Alport症候群; IV型コラーゲン; 抗原賦活

(研究目的)Alport症候群の免疫組織診断を、蛋白質分解酵素による抗原賦活によってパラフィン切片でも簡単で確実に行えるよう改善することである。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いる。この腎組織を腎生検用によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。これを3種類の蛋白質分解酵素(Trypsin、Pepsin、Neutral Protease)により抗原賦活を行い、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する15種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。抗原賦活効果が優れた蛋白質分解酵素について長期間保管したパラフィン切片でも抗原賦活の効果を検討した。(研究成果)Trypsinを用いた抗原賦活によりα1鎖、α2鎖、α5鎖、α6鎖を検出することができた。中でもAlport症候群免疫組織診断用の蛍光二重染色抗体で優れた賦活効果が得られた。賦活効果の良かった抗体は主にコラーゲン領域特異抗体であることから、Trypsinは非コラーゲン領域を分解していると考えられた。Pepsin、Neutral Proteaseは抗原賦活効果が低かった。-80℃、デシケーター、室内に約2年間保管したパラフィン切片でTrypsinによる賦活効果を調べた結果、-80℃に保管した切片の方が反応性が優れていた。なお、Alport症候群の患者の組織は入手できなかった為確認はできていない。

(Objective) Immunohistodiagnosis of Alport syndrome, proteolytic enzyme activation and antigen activation. (Method of study) The conditions for antigen activation were set up. There are two methods for fixing and embedding the kidney tissue. The antigenicity of three kinds of proteolytic enzymes (Trypsin, Pepsin, Neutral Protease), six kinds of type IV alpha (IV) locks, and 15 kinds of alpha lock specific antibodies was confirmed. Antigen activation results are optimized for proteolytic enzymes and stored for a long time. (Research results)Trypsin is activated by antigen α1 lock, α2 lock, α5 lock and α6 lock. A double staining antibody for the diagnosis of Alport syndrome was developed. The activation effect of good antibodies is mainly due to domain specific antibodies. Pepsin, Neutral Protease, Antigen Activating Fruit, Low Profile. - 80℃, storage temperature for about 2 years, storage temperature for-80℃, storage temperature for about 2 years The tissues of patients with Alport syndrome are examined for confirmation.

项目成果

Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果について

蛋白水解酶的抗原激活作用在阿尔波特综合征免疫组织诊断中的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 大川龍之介;他;柴山正美;柴山正美;柴山正美;千田靖子;平千明;平千明;川崎健治;小見山高明
• 通讯作者: 小見山高明