Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果の解析

蛋白水解酶抗原激活在Alport综合征免疫组化诊断中的作用分析

• 批准号: 22931015
• 负责人: 小見山 高明
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22931015/
• 关键词: Alport症候群; IV型コラーゲン; 抗原賦活

(研究目的)Alport症候群の免疫組織診断を、蛋白質分解酵素による抗原賦活によってパラフィン切片でも簡単で確実に行えるよう改善することである。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いる。この腎組織を腎生検用によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。これを3種類の蛋白質分解酵素(Trypsin、Pepsin、Neutral Protease)により抗原賦活を行い、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する15種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。抗原賦活効果が優れた蛋白質分解酵素について長期間保管したパラフィン切片でも抗原賦活の効果を検討した。(研究成果)Trypsinを用いた抗原賦活によりα1鎖、α2鎖、α5鎖、α6鎖を検出することができた。中でもAlport症候群免疫組織診断用の蛍光二重染色抗体で優れた賦活効果が得られた。賦活効果の良かった抗体は主にコラーゲン領域特異抗体であることから、Trypsinは非コラーゲン領域を分解していると考えられた。Pepsin、Neutral Proteaseは抗原賦活効果が低かった。-80℃、デシケーター、室内に約2年間保管したパラフィン切片でTrypsinによる賦活効果を調べた結果、-80℃に保管した切片の方が反応性が優れていた。なお、Alport症候群の患者の組織は入手できなかった為確認はできていない。

(purpose of the study) Alport syndrome: immune tissue disruption, proteolytic enzyme antigen activation, proteolytic enzyme antigen activation, histological examination, histological diagnosis and improvement. (objective) the immune tissue and proteolytic enzymes of Alport syndrome were detected. (research methods) the condition setting of antigen viability was used to detect the activity of antigen in tissue. The organization uses the system to make sure that the system is fixed, the method is fixed, and the usual method is embedded. The proteolytic enzymes (Trypsin, Pepsin, Neutral Protease) of serotype 3 antigens were activated, and the serotypes of serotype IV antigens alpha (IV) specific antibodies of serotype 15 were confirmed by reactivity assay. Antigen liposome, proteolytic enzyme, proteolytic enzyme, enzyme (research results) Trypsin antigen was used to detect α 1, α 2, α 5, and α 6 antigens. The immune tissue of Alport syndrome was cut off by double staining of phosphorescence antibody. The results show that there are significant differences in the field-specific antibodies, and the Trypsin-specific antibodies. The activity of Pepsin and Neutral Protease antigen was low. Take care of the results of Trypsin cryopreservation at-80 ℃ and indoor temperature for about 2 years, and keep the section at-80 ℃ for about 2 years. The tissues of patients with chronic hepatitis and Alport syndrome were tested for confirmation of clinical symptoms.

项目成果

Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果について

蛋白水解酶的抗原激活作用在阿尔波特综合征免疫组织诊断中的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 大川龍之介;他;柴山正美;柴山正美;柴山正美;千田靖子;平千明;平千明;川崎健治;小見山高明
• 通讯作者: 小見山高明