Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果の解析

蛋白水解酶抗原激活在Alport综合征免疫组化诊断中的作用分析

• 批准号: 22931015
• 负责人: 小見山 高明
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22931015/
• 关键词: Alport症候群; IV型コラーゲン; 抗原賦活

(研究目的)Alport症候群の免疫組織診断を、蛋白質分解酵素による抗原賦活によってパラフィン切片でも簡単で確実に行えるよう改善することである。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いる。この腎組織を腎生検用によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。これを3種類の蛋白質分解酵素(Trypsin、Pepsin、Neutral Protease)により抗原賦活を行い、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する15種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。抗原賦活効果が優れた蛋白質分解酵素について長期間保管したパラフィン切片でも抗原賦活の効果を検討した。(研究成果)Trypsinを用いた抗原賦活によりα1鎖、α2鎖、α5鎖、α6鎖を検出することができた。中でもAlport症候群免疫組織診断用の蛍光二重染色抗体で優れた賦活効果が得られた。賦活効果の良かった抗体は主にコラーゲン領域特異抗体であることから、Trypsinは非コラーゲン領域を分解していると考えられた。Pepsin、Neutral Proteaseは抗原賦活効果が低かった。-80℃、デシケーター、室内に約2年間保管したパラフィン切片でTrypsinによる賦活効果を調べた結果、-80℃に保管した切片の方が反応性が優れていた。なお、Alport症候群の患者の組織は入手できなかった為確認はできていない。

（研究目的）通过用蛋白水解酶抗原激活来改善Alport综合征的免疫组织化学诊断，它可以在石蜡切片上轻松而可靠地进行。 （研究方法）人类肾脏组织用于设定抗原激活的条件。使用两种方法固定该肾脏组织：福尔马林固定和酒精bouan固定，通常用于肾脏活检，以及以通常的方式嵌入石蜡。使用三种类型的蛋白水解酶（胰蛋白酶，胃蛋白酶和中性蛋白酶）以及15种类型的α-链特异性抗体的反应性通过抗原激活，从而证实了六种IV型胶原蛋白α（IV）链的六种链条。还研究了具有出色抗原活化作用的蛋白水解酶长期存储的石蜡切片中的抗原活化作用。 （研究结果）使用胰蛋白酶通过抗原激活检测α1，α2，α5和α6链。其中，获得了极好的激活效应，获得了用于诊断Alport综合征免疫组织化学结果的荧光双染色抗体。由于具有良好活化作用的抗体主要是胶原蛋白区特异性抗体，因此人们认为胰蛋白酶可以分解非胶原蛋白区域。胃蛋白酶和中性蛋白酶的抗原延迟作用低。在检查了胰蛋白酶对以-80°C和房间中储存在干燥剂中的石蜡切片的活化作用约2年后，储存在-80°C的切片的反应性更高。此外，无法提供Alport综合征患者的组织，因此尚未做出确认。

项目成果

Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果について

蛋白水解酶的抗原激活作用在阿尔波特综合征免疫组织诊断中的作用

• 发表时间: 2010
• 作者: 大川龍之介;他;柴山正美;柴山正美;柴山正美;千田靖子;平千明;平千明;川崎健治;小見山高明
• 通讯作者: 小見山高明