Alport症候群の免疫組織診断における蛋白質分解酵素による抗原の賦活効果の解析

(研究目的)Alport症候群の免疫組織診断を、蛋白質分解酵素による抗原賦活によってパラフィン切片でも簡単で確実に行えるよう改善することである。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いる。この腎組織を腎生検用によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。これを3種類の蛋白質分解酵素(Trypsin、Pepsin、Neutral Protease)により抗原賦活を行い、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する15種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。抗原賦活効果が優れた蛋白質分解酵素について長期間保管したパラフィン切片でも抗原賦活の効果を検討した。(研究成果)Trypsinを用いた抗原賦活によりα1鎖、α2鎖、α5鎖、α6鎖を検出することができた。中でもAlport症候群免疫組織診断用の蛍光二重染色抗体で優れた賦活効果が得られた。賦活効果の良かった抗体は主にコラーゲン領域特異抗体であることから、Trypsinは非コラーゲン領域を分解していると考えられた。Pepsin、Neutral Proteaseは抗原賦活効果が低かった。-80℃、デシケーター、室内に約2年間保管したパラフィン切片でTrypsinによる賦活効果を調べた結果、-80℃に保管した切片の方が反応性が優れていた。なお、Alport症候群の患者の組織は入手できなかった為確認はできていない。

(研究目的)Alport症候群の免疫組織診断を、蛋白質分解酵素による抗原賦活によってパラフィン切片でも簡単で確実に行えるよう改善することである。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いる。この腎組織を腎生検用によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。これを3種類の蛋白質分解酵素(Trypsin、Pepsin、Neutral Protease)により抗原賦活を行い、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する15種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。抗原賦活効果が優れた蛋白質分解酵素について長期間保管したパラフィン切片でも抗原賦活の効果を検討した。(研究成果)Trypsinを用いた抗原賦活によりα1鎖、α2鎖、α5鎖、α6鎖を検出することができた。中でもAlport症候群免疫組織診断用の蛍光二重染色抗体で優れた賦活効果が得られた。賦活効果の良かった抗体は主にコラーゲン領域特異抗体であることから、Trypsinは非コラーゲン領域を分解していると考えられた。Pepsin、Neutral Proteaseは抗原賦活効果が低かった。-80℃、デシケーター、室内に約2年間保管したパラフィン切片でTrypsinによる賦活効果を調べた結果、-80℃に保管した切片の方が反応性が優れていた。なお、Alport症候群の患者の組織は入手できなかった為確認はできていない。