犬の肥満細胞腫におけるc-kit変異解析とイマチニブ耐性を起こす二次変異の研究

犬肥大细胞瘤C-kit突变分析及伊马替尼耐药二次突变研究

• 批准号: 23925032
• 负责人: 中野 優子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: 日本小動物がんセンター
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23925032/
• 关键词: 犬の肥満細胞腫; c-KIT変異; メシル酸イマチニブ

本研究は、犬の肥満細胞腫に対してc-KIT変異様式の解析、メシル酸イマチニブの奏効性およびイマチニブ耐性を引き起こす二次変異について調査することを目的とした。方法は外科切除後の病理組織もしくは細胞診サンプルの一部からゲノムDNAを抽出した。調査対象とするエクソンはc-KITの一次変異が頻発するエクソン8、9、11、そして二次変異の発生が予想されるエクソン13、14、17とした。PCRにてc-KITの特定のエクソン領域を増幅し、PCR産物のダイレクト・シーケンシングを行った。研究成果1.犬の肥満細胞腫におけるc-KIT変異解析は26例にて実施した。c-KIT変異は13例(50.0%)で確認された。変異の内訳はエクソン11のITD変異は8例、エクソン8のITD変異は2例、エクソン11の欠損変異は2例(c.1663-1671delおよびc.1666-1671del)、エクソン11の点変異(c.1676T>A)が1例であった。エクソン11の欠損変異(c.1663-1671del)およびエクソン11の点変異(c.1676T>A)はいずれも既報にて報告されていない変異であった。2.26例のうちメシル酸イマチニブ±プレドニゾロンにて治療された犬は22例で、c-KIT変異ありが11例、c-KIT変異なしが11例であった。c-KIT変異が認められた犬のメシル酸イマチニブ±プレドニゾロンの奏効率は100%(11/11)、c-KIT変異が認められなかった犬の奏効率は27.3%(3/11)であった。メシル酸イマチニブへの感受性が認められた14例の奏効期間の中央値は134日(14-855日)であった。また、部分奏効群(n=3)の奏効期間の中央値は22日、完全奏効群(n=11)の奏効期間の中央値は188日となり、両群の奏効期間に有意差が認められた(p=0.0060)。3.本研究にて新規変異として確認されたエクソン11の欠損変異(c.1663-1671del)およびエクソン11の点変異(c.1676T>A)はメシル酸イマチニブに感受性であり、これらの変異は機能獲得型変異であることが示唆された。4.c-KIT変異を有し、メシル酸イマチニブに感受性のあった4症例でイマチニブ耐性後の二次変異の検索を実施したところ、1例でエクソン14に点変異(T699I)が確認された。この変異はヒトのGISTにおけるイマチニブ耐性で報告されている点変異(T670I)と同様と考えられた。

这项研究旨在分析犬类肥大细胞肿瘤中的C-KIT突变模式，并研究伊马替尼麦甲酸酯和二次突变的反应，从而导致伊马替尼抗性。该方法是在手术切除后从病理组织或细胞学样本的一部分中提取基因组DNA。研究的外显子是外显子8、9和11，经常发生C-Kit中的主要突变，外显子13、14和17，预计会发生次要突变。通过PCR扩增C-KIT的特定外显子区域，并进行PCR产物的直接测序。研究结果1。在26例病例中进行了狗肥大细胞肿瘤中C-KIT突变的分析。在13例（50.0％）中证实了C-KIT突变。突变的崩溃是在外显子11中的八例ITD突变中的分解，外显子8中的两个ITD突变病例，两个外显子11中的缺失突变病例（C.1663-1671del和c.1666666-1671del），一例在EXON 11中的点突变（C.1676T> a）。外显子11（C.1663-1671DEL）中缺少突变和外显子11（C.1676T> a）中的点突变是两个以前尚未报道的突变。在26例病例中，22只狗用伊马替尼麦甲酸酯±泼尼松龙治疗，11例具有C-KIT突变，11只没有C-KIT突变。 C-KIT突变的狗中伊马替尼甲酸酯±泼尼松龙的反应率为100％（11/11），无C-KIT突变的狗的缓解率为27.3％（3/11）。 14例容易受到伊马替尼梅赛酸酯的患者的反应持续时间为134天（14-855天）。此外，部分响应组的中值响应持续时间（n = 3）为22天，完整响应组的中值响应持续时间（n = 11）为188天，并且在两组之间的响应持续时间之间观察到显着差异（p = 0.0060）。 3。外显子11（c.1663-1671del）中的缺失突变和外显子11（c.1676t> a）中的点突变被证实为这项研究中的新突变对伊马替尼的甲基酸酯敏感，这表明这些突变是功能性突变。 4。当搜索伊马替尼抗性后，在四例C-KIT突变并易受到伊马替尼梅赛酸盐敏感的情况下进行二次突变时，在一种情况下确认了点突变（T699i）。人们认为该突变类似于人类观点中伊马替尼抗性中报道的点突变（T670i）。