がん樹状細胞ワクチン療法における免疫モニタリング法の確立と臨床への応用

癌症树突状细胞疫苗治疗免疫监测方法的建立及临床应用

• 批准号: 23931034
• 负责人: 樋口 由美子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931034/
• 关键词: 樹状細胞療法; MLPC法; テトラマー解析

1)MLPC(Mixed Lymphocyte-PeptideCulture)法の条件の確立(1)健常人末梢血単核球(PBMC)にサイトメガロウイルス(CMV)ペプチドを添加し10%ウシ血清アルブミン(BSA)またはヒトAB血清(HSAB)添加培地で2週間培養した後、テトラマー解析にてCMV特異的CTLを測定した。BSA添加培地では細胞障害性T細胞(CTL)未検出であったが、HSAB添加培地では高頻度に検出された。ゆえに添加血清はHSABが適当と思われた。(2)96wellプレート1wellあたり1×10^5、2×10^5の細胞数にてMLPCを行い、2週間後にテトラマー解析を行った。1×10^5では28well中7wellでCTLを確認したのに対し、2×10^5では14well中全てのwellでCTLを確認した。また、2×10^5では1×10^5に比較して、1wellのテトラマー陽性率が高かった。このことから、2×10^5の播種ではCTLが1well中2個以上存在する可能性が考えられた。ゆえに、より正確にCTLを測定するためには、1wellあたり1×10^5が適当と思われた。(3)5、10、20μMの3濃度の抗原ペプチドを添加してそれぞれMLPCを行った。培養2週間後にテトラマー解析にてCTLを測定した。その結果誘導出来たCD8陽性T細胞中のCTL数は、それぞれ8.4×10^<-6>、10.5×10^<-6>、4.2×10^<-6>であり、10μMが最も誘導率が高かった。2)臨床への応用現行法ではCTLが検出されない患者PBMCを用いて、MLPC後にTetramer解析を行った。ワクチン投与前ではCTLが確認できなかったが、投与7回ではCD8陽性T細胞中6.8×10^<-6>、投与15回では12.3×10^<-6>とCTLが増加していた。MLPC法により、患者末梢血中のCTLの検出率を上げることが可能となった。

1) Establishment of conditions for MLPC(Mixed Lymphocyte-Peptide Culture) method (1) CMV-specific CTL was determined after addition of 10% serum albumin (BSA) and HSAB to healthy PBMC culture for 2 weeks. BSA was added to the culture medium, while CTL was not detected. HSAB was added to the culture medium, but it was detected frequently. Add serum to HSAB and think about it. (2)96well, 1well, 1×10^5, 2×10^5 cells, MLPC, 2 weeks later, MLPC analysis. 1×10^5, 7 out of 28 wells, CTL confirmation, 2×10^5, 14 out of 14 wells 2×10^5, 1×10^5, 1 × 10^5 2×10^5 seeds are planted in a well. 1× 10^5 (3)5 3 concentrations of MLPC, 10 μM and 20μM After 2 weeks of incubation, CTL assay The number of CTL induced in CD8 positive T cells was 8.4×10^<-6>, 10.5×10^<-6>, 4.2×10^<-6>, and 10μM. 2)The current method of CTL detection in clinical trials is used to analyze PBMC, MLPC and Tetramer. CD8 positive T cells increased by 6.8×10^and 12.3×10^respectively after 7 <-6>and 15 rounds of injection<-6>. MLPC method can improve the detection rate of CTL in patients 'peripheral blood.