樹状細胞における人工がん抗原WT1ペプチドと樹状細胞の効率的な反応条件の確立

树突状细胞中人工癌抗原WT1肽与树突状细胞高效反应条件的建立

• 批准号: 24931031
• 负责人: 樋口 由美子
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24931031/
• 关键词: 樹状細胞; WT1ペプチド; WT1特異的リンパ球

実験内容と結果1)WT1ペプチドと樹状細胞(DC)の効率的な反応条件の検討FITCで蛍光標識したWT1ペプチドをDCに4℃、室温、37℃の温度条件下で、5分、10分、15分、30分、1時間パルスし、WT1結合DCをフローサイトメーターにより測定した。その結果、4℃では30分(30.0%)1時間(34.6%)。室温では30分(83.2%)1時間(97.2%)。37℃では5分(54.9%)10分(89.3%)、15分(98.2%)であった。以上より、37℃10分で最も短時間で高率にWT1結合DCを作製できた。反応温度、反応時間による生細胞率の低下も認められなかった。2)WT1特異的リンパ球の誘導次に37℃10分でWT1ペプチドをパルスしたDCとリンパ球を共培養し、2週間後にフローサイトメーターを用いてテトラマー解析を行い、WT1特異的リンパ球を検出した。同様に(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)及び(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)もそれぞれ共培養し、37℃10分パルスDCにおけるWT1特異的リンパ球の誘導率と比較した。その結果、(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)>(37℃10分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)>(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)の順に高頻度にWT1特異的リンパ球が誘導された(6:4:1)。3)細胞障害活性の測定誘導できたWT1特異的リンパ球の絶対数が少なかっため、細胞障害活性を測定することはできなかった。今後、より多くのWT1特異的リンパ球を誘導できる条件の検討が必要である。結論DCとWT1ペプチドの効率的な反応条件は37℃10分であった。WT1ペプチドパルスDCが、WT1特異的リンパ球を誘導することが確認でき、しかもWT1ペプチド結合DCが多いほど誘導率は高かった。

Results 1) WT1 was tested for the efficiency of dendritic cells (DC) by FITC under conditions of 4℃, room temperature and 37℃ for 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 30 minutes and 1 hour. Results, 4℃ 30 minutes (30.0%)1 time (34.6%). Room temperature 30 minutes (83.2%)1 time (97.2%). 37℃ 5 points (54.9%)10 points (89.3%), 15 points (98.2%). Above, 37℃10 minutes, the shortest time, high rate, WT1 combined with DC control. The temperature and time of the reaction were lower than those of the control. 2) WT1-specific sphere-induction time: 37℃10 min WT1-specific sphere-induction time: 2 weeks later WT1-specific sphere-induction time: 37 ℃ 10 min WT1-specific sphere-induction time: 37 ℃ 10 min WT The induction rates of WT1-specific lymphocytes were compared between co-culture (4℃30 min WT1 +DC+ CSF) and co-culture (37℃10 min WT1 +DC+ CSF). The results were as follows: (WT1 selection 10μM+DC+ plasma)>(WT1 selection 10 μ M + DC + plasma). 3)Determination of cellular damage activity. WT1-specific cell damage assay. In the future, there will be more than one WT1 special ball induction. Conclusion The temperature of DC and WT is 37℃ and 10 min. WT1 selection of DCs, WT1 specific DCs induction rate is high