G-CSFによる樹状細胞ワクチン量の増加に関する研究

G-CSF增加树突状细胞疫苗用量的研究

基本信息

  • 批准号:
    22931027
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.32万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
  • 财政年份:
    2010
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2010 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

[目的]樹状細胞療法をうける患者にG-CSFを投与することにより、樹状細胞ワクチンの作製量を増やすことができるかということを、単球表面の接着分子及び細胞外マトリックスの発現に着目し解明する。[方法]1.対象樹状細胞療法を行う患者7名を対象とし、G-CSF投与前と投与24時間経過した後の末梢血を用いた。2.末梢血からの単球分離末梢血より比重遠心分離法を用いて単核球を分離した後、CD14Micro Bead (Miltenyi Biotec)と反応させ、磁気分離装置(Auto MACS)を用いてCD14陽性細胞を分離した。3.PCRアレイ分離したCD14陽性細胞よりtotal RNAを抽出し、RT反応によりcDNAを作製した後、RT^2 SYBER Green/Rox qPCR Master Mix (Quiagen)を用いてPCR反応液を作製し、RT^2 Progiler PCR Array (Quiagen)を用いて定量PCRを行った。装置はABI7900 (Applied Biosystems)を使用した。[結果]末梢血より分離したCD14陽性細胞のうち、単球は97.86±2.62%であった。PCRアレイを用いて84種類の接着分子及び細胞外マトリクスの発現解析をした結果、G-CSF投与前に比較して投与後ではMMP9のmRNA発現量が7.62倍に増加していた(最大値29.61倍・最小値1.91倍)。MMP9はヒト末梢血単球においても少量分泌されており、in vitroの実験においては単球を培養する際にPMAまたはM-CSFを添加することによりMMP9の分泌量が増加し、単球の接着性、伸展性が促進されることが報告されている(mRNA量はそれぞれ7倍、5倍)。今回の結果は、その報告を強く支持するものであり、G-CSF投与により単球のシャーレへの接着が増強され、結果的に樹状細胞ワクチンの作製量が増加すると考えられた。
[Objective] Dendritic cell therapy can increase the amount of G-CSF administered to patients and explain the development of G-CSF on the surface of cells. [Methods]1. Tree-like cell therapy was performed in 7 patients before and after G-CSF administration. 2. CD14 Micro Bead (Miltenyi Biotec) and magnetic separation device (Auto MACS) were used to isolate CD14 positive cells. 3. PCR isolation of CD14 positive cells, total RNA extraction, RT reverse transcription, cDNA preparation, RT^2 SYBER Green/Rox qPCR Master Mix (Quiagen), PCR reverse transcription, RT^2 Progiler PCR Array (Quiagen), quantitative PCR. The ABI7900 (Applied Biosystems) is used. [Results] CD14 positive cells isolated from peripheral blood were 97.86±2.62%. The expression of MMP-9 mRNA increased by 7.62-fold (maximum 29.61-fold, minimum 1.91-fold) compared with that before and after G-CSF administration. MMP9 was secreted in peripheral blood cells in vitro and in vitro. When cultured in vitro, PMA and M-CSF were added to the cells. The secretion of MMP9 increased, and the adhesion and extensibility of the cells were promoted (mRNA levels were 7-fold and 5-fold). The results of this review are as follows: 1. Support for G-CSF investment in cell clusters is increasing, 2. Support for G-CSF investment in cell clusters is increasing, 3. Support for G-CSF investment in cell clusters is increasing.

项目成果

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知道了