滑膜肉腫におけるHGFの局在及び機能に関する病理組織学的研究

HGF在滑膜肉瘤中的定位和功能的组织病理学研究

基本信息

批准号：
08770117
负责人：
石田剛
金额：
$ 0.77万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770117/
关键词：
滑膜肉腫 HGF c-Met カドヘリン免疫組織化学 Northern blot法 Western blot法

项目摘要

滑膜肉腫の培養細胞株を用いたHGFならびにc-Metの発現を検討した結果、二相性滑膜肉腫の培養細胞株(SW982)、および単相性滑膜肉腫の培養細胞株(HS-SY-II)の両者ともNorthern blot法にてHGFのmRNAは検出されなかった。したがって、これら細胞培養株ではHGF産生能はないか、あったとしてもきわめて低いことが示唆された。一方、SW982、HS-SY-IIの両者でc-Metの発現がWestern blot法にて確認された。しかし、その発現はSW982において強く認められたものの、HS-SY-IIではSW982に比べ弱かった。さらに、HGFを添加した場合、SW982に発現しているc-Metにチロシンリン酸化が起こるか否か検討した結果、c-Metのチロシンリン酸化が確認された。したがって、これら細胞培養株でのc-Met発現量には差があると考えられ、また、発現しているc-Metは機能的にHGFへの反応性を有していると考えられた。リコンビナントHGFを添加し、SW982の培養細胞に形態変化が生じるか否か検討した。その結果、SW982に明かな上皮化を思わせる形態変化は観察されなかった。通常の2次元培養下ではこの変化をとらえることは困難で、今後のさらなる検討が必要と考えられた。二相性および単相性滑膜肉腫の凍結新鮮材料を用い、Eカドヘリン、Nカドヘリンの発現を免疫組織化学的に検討した。その結果、二相性滑膜肉腫では上皮成分にのみEカドヘリン、Nカドヘリンの発現が認められた。単相性滑膜肉腫では上皮様胞巣部のみにEカドヘリンの発現が認められた。今後、細胞接着分子の観点からも滑膜肉腫における上皮化という現象を検討する必要があると考えられた。

由于使用滑膜肉瘤的培养细胞系检查了HGF和C-MET的表达，因此在双相滑膜肉瘤（SW982）的培养细胞系中，未检测到HGF的mRNA，或者在北印迹方法中检测到HGF的表达，或者在单型单相关型肉瘤（SW982）的培养细胞系中未检测到。因此，建议这些细胞培养菌株没有产生HGF的能力，或者如果有的话，则非常低。另一方面，在SW982和HS-SY-II中，通过Western blot方法证实了C-MET的表达。然而，尽管在SW982中强烈观察到其表达，但在HS-SY-II中比SW982弱。此外，当添加HGF时，在SW982中表达的C-MET中发生酪氨酸磷酸化，并确认C-MET的酪氨酸磷酸化。因此，人们认为在这些细胞培养菌株中C-MET表达的量有差异，并且表达的C-MET在功能上对HGF有反应。添加重组HGF以确定SW982培养细胞中是否发生形态学变化。结果，在SW982中没有观察到类似明显上皮化的形态变化。在正常的二维文化下，很难捕获这一变化，并且认为将来需要进一步的研究。使用冷冻新鲜材料用于双相和单相滑膜肉瘤，对E-钙粘着蛋白和N-钙粘着蛋白的表达进行了免疫组织化学研究。结果，仅在双相滑膜肉瘤的上皮成分中观察到E-钙粘着蛋白和N-钙粘着蛋白的表达。在单浮体的肉瘤中，仅在上皮样肺泡区域观察到E-钙粘蛋白的表达。人们认为，从细胞粘附分子的角度来看，有必要检查滑膜肉瘤中上皮化现象。