遺伝子工学による腫瘍特異的キラーT細胞の効率的誘導法の確立

基因工程建立肿瘤特异性杀伤T细胞高效诱导方法

• 批准号: 08770152
• 负责人: 齊尾 征直
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770152/
• 关键词: 腫瘍免疫; B7; キラーT細胞

本研究では、B16メラノーマ(B16)にマウスB7.2cDNAを市販CMVプロモータプラスミドベクターを用いて形質導入し、B16/B7.2-97安定発現株(B16B7)を樹立した。B16野生株(B16wt)及びB16B7をB6マウス皮下に1×10^6個接種し、増殖速度を観察したが両者に有意差はなかった。続いてクラス1遺伝子の形質導入を試みたが、α鎖のみでは困難であったため、これと平行して新たな実験系も計画した。すなわち、B16はマウスIFN_γ刺激にてH-2K^b、2D^bのいずれも高度に発現することが判明したため、B16B7、B16wtを200U/mlのIFN_γで48時間刺激した後、B6皮下に接種し腫瘍増殖速度の相違を観察した。完全拒絶には至らなかったが、コントロール群に比し明らかにB16B7IFN_γ処理群で腫瘍増殖速度の低下がみられ、腫瘍内浸潤リンパ球(TIL)の増加と腫瘍細胞の広範な壊死が認められた。また、B16wtIFN_γ処理群にも腫瘍増殖速度の低下傾向がみられた。注目すべきは、B16B7IFN_γ処理群で、自作IL-2プローブ(421bp、ジゴキシゲニン標識)を用いたin-situハイブリダイゼーションにて、TILに強い染色性がみられたことである。これは、クラス1抗原のみの発現ではアネルギーに陥っていたT細胞が、B7.2形質導入腫瘍株により効率的に抗原呈示され、活性化されたことを示唆する。これは、腫瘍細胞を抗原呈示細胞類似の状態にするという、本研究初期の目標を達したものである。以上の結果をまとめ、論文投稿準備中である。なお、クラス1遺伝子の形質導入については、β2Mとの共発現や他の発現ベクターの利用により導入株の樹立が見込まれる。また、EL-4リンパ腫へのB7.2遺伝子の形質導入についても単独では成功しなかったが、SV-401argeT抗原の共導入が必要であることが判明し、共導入をはじめた。

In this study, B16/B7.2 cDNA was introduced into the market and B16/B7.2-97 stably developed strain (B16B7) was established. B16 wild strain (B16wt) and B16B7 were inoculated subcutaneously with 1×10^6 inoculations, and the propagation rate was observed. The first part of the article is about the quality of the product. B16, B16, B17, B18, B18, B19, B19, B1 In contrast to B16B7 IFN_γ treatment group, tumor proliferation rate decreased, tumor infiltration rate increased, and tumor cell proliferation rate increased. B16wtIFN_γ treatment group had a tendency to decrease the proliferation rate of tumor cells. Note that B16B7IFN_γ treatment group, self-made IL-2 protein (421bp, The expression and activation of antigen1 in T cells and B7.2 plasmid introduced into tumor cells were studied. The aim of this study was to demonstrate the similar state of tumor cells. The above results are in preparation for submission. The co-generation of β 2 M and the utilization of other genes in the introduction of β2M and β2M genes are discussed. The introduction of B7.2 gene into the genome of EL-4 gene was successful, and the co-introduction of SV-401argeT antigen was necessary.