細胞表面B7分子による自己グリオーマ細胞特異的キラーT細胞誘導に関する実験-B7分子遺伝子導入による遺伝子治療の基礎実験-

细胞表面B7分子诱导自体胶质瘤细胞特异性杀伤T细胞的实验-B7分子基因转移基因治疗的基础实验-

• 批准号: 06771101
• 负责人: 黒須 昭博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771101/
• 关键词: B7; キラーT細胞; 遺伝子治療; 悪性グリオーマ

抗原提示細胞には、その細胞表面にB7分子を発現しており、細胞傷害性T細胞(CTL)誘導に重要な分子であることが示された。B7分子を遺伝子導入されたメラノーマ細胞では、未処置の細胞に比し、高率にCTL誘導を起こすことが知られている。グリオーマ細胞とメラノーマ細胞とは発生母地を同じくし、今回我々が用いたマウスグリオーマ細胞、RSVMではB7の発現は認められなかった。そこで、この細胞にB7を遺伝子導入し、B7分子を発現するtransfectantを作成、in vitroでCTLを誘導させたところ、未処置RSVMに比し、高率にCTLを誘導することがわかった。我々が用いている実験系では、C3Hマウスと同系のグリオーマ株細胞であるRSVMを用いる。当大学免疫学教室の東が作成したB7 plasmid vectorを用い、large prepにて増やした後にリポフェクチン法によりRSVMにtransfectし、B7分子の発現に関しては、FACS analysis(現有設備)にて発現量を計測する。adenovirusに関しては、まずshuttle vectorにB7分子を導入、それをlarge prepにて増殖させた。一方、adenovirusを含むcosmid vectorを同様の方法で増殖、それぞれを腎癌細胞にtransfectすることにより、B7分子をpackagingしたadenovirusを作成に成功した。次にC3Hマウスの脾細胞を摘出しリンパ球を採取、リンパ球と放射線にて不活化したRSVM細胞とを3日間cocultureすること(MLTR;mixed lymphocytetumor reaction)により、CTLを誘導したところ標的グリオーマ細胞に高いキラー活性をしめした。

Your cells antigen に は, そ の cell surface に B7 molecule を 発 now し て お り, cell damaging T cells (CTL) induced に important な molecular で あ る こ と が shown さ れ た. Traces of B7 molecules を 伝 son import さ れ た メ ラ ノ ー マ cells で は に, not 処 の cells than し, high rate に CTL induction を こ す こ と が know ら れ て い る. グ リ オ ー マ cells と メ ラ ノ ー マ cells と は 発 biological mother to を with じ く し, now back to my 々 が with い た マ ウ ス グ リ オ ー マ cells, RSVM で は B7 の 発 は now recognize め ら れ な か っ た. そ こ で, こ の cells に B7 を heritage 伝 import し, B7 molecule を 発 now す る transfectant を is made, the in vitro で induced CTL を さ せ た と こ ろ, not 処 RSVM に than し, high rate of に induced CTL を す る こ と が わ か っ た. I 々 が with い て い る be 験 department で は, C3H マ ウ ス と homologous の グ リ オ ー マ plant cells で あ る RSVM を with い る. When the university immunology classroom の east が made し た B7 plasmid vector を い, large prep に て raised や し た after に リ ポ フ ェ ク チ ン method に よ り RSVM に transfect し, B7 molecule の 発 now に masato し て は, both FACS analysis(existing equipment)にて occurrence volume を measurement する. adenovirusに is related to て て, まずshuttle vectorにB7 molecule を introduction, それをlarge prepにて proliferation させた. Side, adenovirus を containing む cosmid vector を with others の way で raised colonization, そ れ ぞ れ を kidney cancer cells に transfect す る こ と に よ り, B7 molecule を packaging し た adenovirus を made に successful し た. Time に C3H マ ウ ス の spleen cells を pick the し リ ン パ ball を take, リ ン パ ball と radiation に て inactive し た RSVM cells と を 3 day coculture す る こ と (MLTR; Mixed lymphocytetumor reaction) に よ り, induced CTL を し た と こ ろ mark グ リ オ ー マ high cell に い キ ラ ー active を し め し た.