白血病誘発能をもつHTLV-Iトランスフォーム細胞の表面に発現する蛋白質の解析

具有白血病诱导能力的HTLV-I转化细胞表面表达蛋白分析

• 批准号: 08770214
• 负责人: 永野 幸生
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770214/
• 关键词: HTLV-I; 家兎; 成人T細胞白血病

家兎の白血病関連抗原の発現クローニング法をアフリカミドリザルの細胞株COS-7を用いて、種々の方法で試みた。しかし、この試みは成功しなかった。蛍光抗体法で家兎のHTLV-Iで形質転換したいくつかのT細胞株を調べたところ、この抗原は、異なった局在場所あるいは異なったコンフォメーションを示すことがわかっている。このことから、このような奇妙な性質を示す抗原を異種の細胞株できちんと発現させるのは難しいと推定された。発現クローニング法が成功しなかったので、この抗原を精製し、アミノ酸配列を決定し、アミノ酸配列に基づいて、cDNAクローニングを試みることにした。レクチンカラム、抗体カラムを通し、精製された家兎の白血病関連抗原を得た。アミノ末端がブロックされていたので、アミノ末端以外の部分のアミノ酸配列を決定することにし、精製タンパク質を臭化シアンで切断し逆相クロマトグラフィーで精製した。得られたいくつかのピークのアミノ酸配列をエドマン分解法で決定することを試みた。しかし、すべての断片がブロックされており、アミノ酸配列を決定することはできなかった。配列決定を試みたピークにアミノ酸が含まれていることは、アミノ酸分析により確認しており、アミノ酸配列を決定できなかった原因は不明である。このこと以外にも、この抗原は100℃で煮沸しても抗原性が失われない等、奇妙な性質を示すことがわかった。家兎の白血病関連抗原の奇妙な生化学的性質ばかりがわかった研究結果であったが、今後は、タンパク質を切断する方法を考えたり、切断断片を分離する方法を変えて、アミノ酸配列の決定を進めることが大切である。

The cell line COS-7 was used to detect leukemia-associated antigens in human leukemia cells.しかし、この试みは成功しなかった。Light antibody method is used to detect the expression of HTLV-I in T cell lines. This is a wonderful property of the heterogeneic cell line. The method of discovery and sequencing was successful, the antigen was purified, the acid sequence was determined, the nucleotide sequence was determined, and the cDNA sequence was tested. The leukemia-associated antigens were purified and purified. To determine the acid alignment of parts other than the terminal, to refine the quality, to cut off the reverse phase, and to refine the structure. The method of decomposition is used to determine the acid distribution. This is the first time I've ever been able to make a decision about acid allocation. Determination of acid composition: determination of acid composition: determination of acid composition: The antigen is boiled at 100℃, and its antigenicity is lost. The results of the study on the biochemical properties of leukemia-associated antigens in the family are as follows: