家兎角膜内皮細胞cDNA LibraryのDirect Sequencing

兔角膜内皮细胞cDNA文库的直接测序

• 批准号: 11771076
• 负责人: 橘 信彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771076/
• 关键词: 角膜内皮細胞; cDNAクローン; 相同性検索; シークエンス; ESTs(Expression sequence tags); cDNA; Type VIIIコラーゲン; SPARC

角膜内皮細胞に多く発現する遺伝子を探ると同時に、角膜内皮で発現する未知の遺伝子を見いだす事を目的とした。今回用いた家兎角膜内皮細胞cDNAライブラリーは二宮善文教授(現岡山大学)より供与を受けたもので、家兎200羽の角膜内皮を剥離し培養した細胞から作られている。このライブラリー中の独立したクローン1000個について解析を行い、その結果、既知配列と相同性が高いものの他、頻度の高いESTと一致したクローンや未知のクローンを認めた。頻度の高い未知のクローン6種のうち上位3種(RCE1 3)に関してその塩基配列を決定し、アミノ酸配列に変換しopen reading frameを推定した。その配列をアミノ酸データベースに対して検索を掛けその機能を推測した。RCE1は、DNAレベルでは2つのESTと約90%、アミノ酸レベルではesophageal cancer related proteinのひとつと約80%の相同性を認めた。現在RT-PCR法及び、ノーザン法を用いて角膜内皮および、他の臓器における発現量の比較を行っている。この遺伝子の機能は不明であるが、角膜内皮細胞に多く発現していることから、内皮細胞の生理的な機能に重要な役割を持つものと考えられ、解析をすすめている。RCE2に関してDNAレベルでは、Oryctolagus cuniculus collagenase-1 precursorと部分的に約90%の相同性を認め、この部分の配列は、他のウサギ遺伝子とも多く一致していた事から、ウサギに特徴的な塩基配列である可能性がある。RCE3に関してDNAレベルではHomo sapiens DA41 mRNA,complete cdsと38bpにわたり、100%の相同性を認めた。RCE2,RCE3のアミノ酸レベルでの相同性のあるものはなかったので今後明らかにしていきたい。

に corneal endothelial cells more く 発 now す る heritage 伝 son を agent る と に, corneal endothelial で 発 now す る unknown の heritage 伝 を son see い だ す matter を purpose と し た. This recycle い た home 兎 corneal endothelial cells cDNA ラ イ ブ ラ リ ー は two GongShanWen (now) okayama university professor よ り を and supply by け た も の で, home 兎 200 の corneal endothelial を stripping し cultivate し た cells か ら as ら れ て い る. こ の ラ イ ブ ラ リ ー の in independent し た ク ロ ー ン 1000 に つ い て parsing を い, そ の results, both with high column と phase gay が い も の の his consistent, high frequency の い EST と し た ク ロ ー ン や unknown の ク ロ ー ン を recognize め た. High frequency の い unknown の ク ロ ー ン six の う ち upper three (3) RCE1 に masato し て そ の salt base with を decided し, ア ミ ノ acid with column に variations in し open reading frame presumption を し た. そ の match column を ア ミ ノ acid デ ー タ ベ ー ス に し seaborne て 検 hang rope を け そ の function を speculation し た. RCE1 は, DNA レ ベ ル で は 2 つ の EST と about 90%, ア ミ ノ acid レ ベ ル で は esophageal cancer related protein の ひ と つ と about 80% gay を の phase recognition め た. Now rt-pcr method and び, ノ ー ザ を ン method with い て corneal endothelial お よ び, he の viscera に お け る 発 line amount is の is を っ て い る. こ の posthumous son 伝 の function は unknown で あ る が, corneal endothelial cells に く 発 now し て い る こ と か ら, endothelial cells, の physiological function of な に cut を hold important な service つ も の と exam え ら れ, parse を す す め て い る. RCE2に gateway てDNAレベ で で Oryctolagus cuniculus collagenase-1 We part と に about 90% の identity を confess め, こ の part の column は, he の ウ サ ギ heritage 伝 son と も く more consistent し て い た matter か ら, ウ サ ギ に of 徴 な salt base with column で あ る possibility が あ る. RCE3に related station てDNAレベ で で で Homo sapiens DA41 mRNA,complete cdsと38bpにわた めた にわた 100% <s:1> identical を recognition めた. RCE2, RCE3 の ア ミ ノ acid レ ベ ル で の identity の あ る も の は な か っ た の で future Ming ら か に し て い き た い.

项目成果

藤巻拓郎 その他: "Large-scale sequencing of the rabbit corneal endothelial cDNA library."Cornea.. 18. 109-114 (1999)

Takuro Fujimaki 其他：“兔角膜内皮 cDNA 文库的大规模测序。”Cornea.. 18. 109-114 (1999)

Fujimaki T,Hotta,Sakuma H et al.: "Large Scale Sequencing of the Rabbit Corneal Endothellal cDNA Library"Cornea. 18. 109-114 (1999)

Fujimaki T、Hotta、Sakuma H 等：“兔角膜内皮 cDNA 文库的大规模测序”角膜。