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ヒトMAdCAM-1遺伝子の単離と発現分布.調節機構の解析-腸管、粘膜疾患関連関節炎の病態への関与-

人类 MAdCAM-1 基因的分离和表达分布分析 - 参与肠道和粘膜疾病相关关节炎的病理学 -

基本信息

批准号：
08770324
负责人：
小池竜司
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770324/
关键词：
MAdCAM-1 ラット cDNA ゲノム

项目摘要

まずヒトにおいてマウスMAdCAM-1cDNAに交叉反応性が存在するかを調べるため、ヒトゲノムDNAを用いてサザンハイブリダイゼーション解析を行った。しかし種々の条件においていずれもクロスハイブリダイズが見られず、核酸配列での交叉性はかなり低いと考えられた。いっぽうマウスMAdCAM-1cDNAの塩基配列とゲノム構造を参考に数種類の組み合わせでPCRプライマーを作製し、ヒト腸間膜リンパ節cDNAを鋳型としてPCR反応を行いヒトMAdCAM-1cDNA断片を得ることを試みた。PCR反応条件も様々に検討しながら進めたが、結果的にはヒトMAdCAM-1ホモログ由来と思われるPCR産物を得ることができず、ヒトとマウスの間の相同性がかなり低いためにこれらの方法で単離することは困難と判断した。そこで同時にラットについてマウスMAdCAM-1cDNAをプローブとしたサザン解析を行ったところクロスハイブリダイズを確認できたため、ラットゲノムライブラリをスクリーニングしたところラットMAdCAM-1ホモログの遺伝子を単離することに成功した。さらに一部の塩基配列決定を行い、これをもとにプライマーを作製し、ラットパイエル板cDNAを鋳型としてRT-PCR法を用いてラットMAdCAM-1cDNAも単離することができた。ラットMAdCAM-1はマウスと89.5%のホモロジーを有し、ゲノム構造も酷似していた。ノーザン解析ではマウス同様に腸間膜根リンパ節とパイエル板に発現を認めたが、マウスで発現が見られる脾臓では発現が認められなかった。今後はラットホモログの解析を進め、まず動物疾患モデルにおいてMAdCAM-1分子の機能や役割について検討を行い、さらに発現や機能の制御を最終的にヒトの疾患治療に応用していくことを検索して行く予定である。

The cDNA of MAdCAM-1 is a cross-linked protein that can be used to analyze DNA. The conditions for the production of nucleic acid are as follows: The gene sequence of MAdCAM-1 cDNA was determined by PCR amplification and DNA sequencing. PCR reaction conditions are difficult to determine if the PCR products are identical to each other. The analysis of MAdCAM-1 cDNA was successful in identifying MAdCAM-1 cDNA. The analysis of MAdCAM-1 cDNA was successful in identifying MAdCAM-1 cDNA. A part of the DNA sequence was determined by RT-PCR. MAdCAM-1 has 89.5% of its original design. It is the same with the intestinal membrane. It is the same with the intestinal membrane. It is the same with the intestinal membrane. In the future, the analysis of MAdCAM-1 in animal diseases will be further developed, and the functional analysis of MAdCAM-1 will be carried out, and the functional control of MAdCAM-1 will be discovered.