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遺伝性自己免疫疾患関連遺伝子のポジショナルクローニング

遗传性自身免疫性疾病相关基因的定位克隆

基本信息

批准号：
08770331
负责人：
浅川修一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770331/
关键词：
ポジショナルクローニング自己免疫疾患 APECED BAC 21q22.3 KNP-1 PWP2 エキソントラッピング

项目摘要

Autoimmune polyglandular disease type 1(APECED)のマップされている21q22.3上のマーカーMX1-D21S171間約3Mbの領域に関してBAC/コスミドクローンの整列化(コンティグ)を行い2.5Mbをカバーした。これらのコンティグのうちLJ-104-PFKL-D21S154を含む400kbについてエキソントラッピング法を適用して22個のエキソンを単璃した。それらのうち6エキソンは既知遺伝子PFKL(2エキソン)、EHOC-1(4エキソン)に、また2エキソンは既知cDNA,PWP2に帰属された。未同定エキソンをプローブとしてcDNAライブラリースクリーニングを行い1個の遺伝子KNP-1(1エキソン)のcDNAを単璃し、その全構造を決定した。さらにのべ150kbにおよぶゲノムDNAの塩基配列を行いPWP2、KNP-1遺伝子のゲノム構造を明らかにした。また数種のヒト組織別ノーザンブロットを用いてKNP-1の発現の組織特異性を明らかにした。既知遺伝子との相同性を比較検討した結果KNP-1はゼブラフィッシュのES1、大腸菌のSCRP27Aとの相同性がみられたがともに機能が明らかでないため、KNP-1の機能も不明である。遺伝子のゲノム配列をもとにPWP2、KNP-1の各エキソンを増幅するPCRプライマーを作製した。現在疾患家系に特異的な塩基置換等の有無を調べている。

Autoimmune polyglandular disease type 1(APECED) is classified into two categories: MX1-D21S171, 21q22.3, 2.5Mb, and 3Mb. LJ-104-PFKL-D21S154 contains 400kb and is suitable for 22 applications. The gene PFKL(2), EHOC-1(4), 2 cDNA,PWP-2 belong to the family. The cDNA sequence of KNP-1(1) gene was determined by the sequence analysis of the cDNA sequence. The 150kb DNA fragment was sequenced and the DNA fragment structure of PWP-2 and KNP-1 was clarified. The tissue-specific expression of KNP-1 was demonstrated in several different tissues. The results showed that the identity of KNP-1 and SCRP27A was not clear, and the function of KNP-1 was unknown. The sequence of DNA sequences was determined by PCR amplification of PWP2 and KNP-1. The presence or absence of gene substitutions specific to the disease family is now regulated.