肝類洞細胞に発現する特異蛋白のcDNAクローニングとその機能解析

肝窦细胞特异蛋白的cDNA克隆及其功能分析

• 批准号: 08770375
• 负责人: 河田 則文
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770375/
• 关键词: 肝線維化; 星細胞; 筋線維芽細胞; 平滑筋型アクチン; 一酸化窒素

A.抗星細胞モノクローナル抗体の解析1.抗星細胞モノクローナル抗体を作製した結果,線維化の進展する肝に発現するエピト-ブを認識することが判明した.本分子はWestern Blotによる解析では分子量78 KDaである.本分子を同定するために,星細胞からcDNA libraryを作製し,pBluescript II (+)にligationしてpBR322細胞へとtransformした.得られたtransformantが作製する蛋白をnitrocellurose膜に写し取り,モノクローナル抗体と反応する蛋白を産生しているcloneをスクリーニングしたがpositive signalが得られなかった.この原因として,1)libraryの問題,2)Screeningの問題,の二つが考えられる.これらを克服するために,再びlibraryを作製し、今後はλ gtllに組み込んで抗体でスクリーニングする方法へ転換した.現在スクリーニングを継続中である.B.星細胞のtransformationを制御する機構の解析1.星細胞のtransformationを制御する機構の解析は肝の線維化を解明するために重要なテーマである.cAMP関連物質やmethylxanthine類が星細胞の形質転換を阻害することを観察して報告した(Dig Dis Sci).また,新しい星細胞の活性化マーカーとしてNCAMが有用であることを報告した(Cell Tissue Res).さらにretinoic acidが星細胞のTGFβ産生をupregulateすることで肝の線維化を促進することを観察した.(paper in submission).今回,NOが本transfomationを調節する重要な因子であることを見出した.星細胞をLPSやIFNγで刺激するとそのDNA合成とsmooth muscle α-actin産生が抑制される.また,星細胞をLPSやIFNγで刺激するとその培養上清中にはnitriteが増加する.そこで,LPSやIFNγで刺激するときに,LNAを同時添加してNOの産生をblockしてみた.その結果,DNA合成は有意に回復した.また,smooth muscle α-actinの発現抑制も明らかに解除された.この様な結果から,NOは星細胞の活性化を負に制御する重要な内因性物質であることが考えられ,さらに検討を進めている(BBRC,in press).2.星細胞の活性化と関与する転写調節因子の解析---星細胞の活性化は種々の遺伝子発現誘導を伴うため,その遺伝子発現を制御する転写調節因子の動態を調べることも大切である.あらたに見つかったSTATが星細胞にも発現しており,interferonのみでなくPDGF刺激でも活性化されることから星細胞の増殖と深く関与する可能性がある(paper in submission).

a. Analysis of anti-star cell antibody 1. The results of the anti-stellar cytosol antibody test were used to verify the results of the test, and the results were verified by the anti-star cell antibody antibody. The molecular weight is 78 KDa. The molecular weight is 78 KDa. This molecule has the same definition as cDNA library, pBluescript II (+), ligation, pBR322, and transform. The protein was extracted from the nitrocellurose membrane by transformant, and the protein was obtained by the antibody from the protein, the protein from the clone, the positive signal from the positive signal. The cause is incorrect, 1) the library problem, 2) the Screening problem, and the second question. In order to overcome the problem, we will use library to do this. In the future, we will use λ gtll to organize the antibody test and improve the method. Now we are in the middle of the war. B. Analysis of the mechanism of satellite transformation control system 1. The satellite transformation system is responsible for the analysis and maintenance of the computer. It is clear that the important information is important. The methylxanthine type of the camp connection is the star cell. It prevents the damage from the monitoring report (Dig Dis Sci). The new star cell is active, the NCAM is useful, and the Cell Tissue Res is useful. The retinoic acid star cell TGF β is responsible for the production of upregulate, liver, liver and liver. (paper in submission). This time, the NO transfomation is very important. LPS IFN γ stimulates the synthesis of smooth muscle α-actin and inhibits the synthesis of smooth muscle α. The supernatant of the supernatant was stimulated by LPS and IFN gamma. The supernatant of the supernatant was incubated with nitrite. For example, LPS IFN γ stimulates block spores, and at the same time, add NO rays to generate block spores. The result of the experiment showed that the DNA composite intended to return the data. Smooth muscle α-actin has been shown to inhibit the release of malondialdehyde. The results show that the NO satellite cell activation system controls the important internal factors, such as the internal cause, the temperature, the temperature and the temperature (BBRC,in press). 2. Analysis of the activation of star cells and the analysis of reading factors-the activation of several kinds of star cells leads to the presence of a partner, and the user is able to control how to write a factor, which is very important. The density of the STAT cells is different from that of the interferon cells, the PDGF stimulation, the activation, the depth of colonization, and the possibility of colonization (paper in submission).

项目成果

Kawada N: "Inhibition of myofibroblastic transformation of rat hepatic stellate cells by methylxanthines and dibutyryl cAMP" Dig. Dis. Sci.41. 1022-1029 (1996)

Kawada N：“甲基黄嘌呤和二丁酰 cAMP 对大鼠肝星状细胞肌成纤维细胞转化的抑制” Dig。

Kawada N: "Regulation by cAMP of STATl activation in hepatic stellate cells" Biochem. Biophys. Res. Commun.in press.

Kawada N：“cAMP 对肝星状细胞中 STAT1 激活的调节”Biochem。

Kawada N: "Expression of heat shock protein 47 in mouse liver" Cell Tissue Res.284. 341-346 (1996)

Kawada N：“小鼠肝脏中热休克蛋白 47 的表达”Cell Tissue Res.284。

Kawada N: "Effect of adrenomedullin on hepatic pericyte (stellate cells) of the rat" FEBS Lett.356. 109-113 (1994)

Kawada N：“肾上腺髓质素对大鼠肝周细胞（星状细胞）的影响”FEBS Lett.356。

Kawada N: "Morphological study of endothelin 1-induced contraction of cultured hepatic stellate cells on hydrated collagen gels." Cell Tissue Res.286. 477-486 (1996)

Kawada N：“内皮素 1 诱导的水合胶原凝胶上培养的肝星状细胞收缩的形态学研究。”