HIVベクターによる血球系細胞(リンパ球、造血幹細胞)への遺伝子導入

使用 HIV 载体将基因转移至血细胞（淋巴细胞、造血干细胞）

• 批准号: 08770868
• 负责人: 三宅 弘一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nippon Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770868/
• 关键词: HIVベクター; リンパ球; 造血幹細胞; 遺伝子治療

当教室で開発されたHIVベクターによる血球系細胞への高率な遺伝子導入法の開発を行う事を目的とし、HIVベクターによる血球系細胞(リンパ球、造血幹細胞)への遺伝子導入を行った。1.末梢血リンパ球への遺伝子導入末梢血単核球よりCD4陽性細胞を採取後、リンパ球刺激因子(IL2、PHA)存在下にてβ-ガラクトシダーゼおよびアルカリフォスファターゼ発現HIVベクター感染により遺伝子導入を行ったところ約0.1%程度の遺伝子導入が可能であった。導入された遺伝子がリンパ球の染色体に挿入されているかの確認を、ネオマイシン耐性遺伝子を持つHIVベクターにて末梢血リンパ球に遺伝子導入し、G418にて選択後の細胞のDNAを用いてLMPCR(Linker Mediated PCR)によりHIVベクターの染色体への挿入部位を増幅し、塩基配列を決定することにより行った。同様の実験を感染時リンパ球刺激因子非存在下にて行ったところほとんど遺伝子導入はできなかった。2.造血幹細胞への遺伝子導入骨髄細胞よりCD34抗体を用いてCD34陽性細胞を純化し、CD4遺伝子を持つアデノウイルスベクターを感染させHIVのレセプターであるCD4を発現させた後、各種サイトカイン(IL3,IL6、SCF)存在下にてβ-ガラクトシダーゼおよびアルカリフォスファターゼ発現HIVベクターの感染により遺伝子導入し導入効率の検討を行ったが、β-ガラクトシダーゼおよびアルカリフォスファターゼ陽性細胞はほとんど認められなかった。その原因として、CD34陽性細胞のアデノウイルスベクターによるCD4発現効率が低いこと、細胞毒性が認められること、およびHIVベクターの力価が低いこと等が考えられた。今後、細胞毒性が少なく力化の高いアデノウイルスベクターの開発、HIVベクターの力価の上昇を行っていくとともにシュードタイプベクターによる遺伝子導入も検討の予定である。

When the classroom で 発 さ れ た HIV ベ ク タ ー に よ る blood cell へ の high rate な heritage 伝 son import method の open 発 を doeth う を purpose と し, HIV ベ ク タ ー に よ る blood cell (リ ン パ ball, hematopoietic stem cells) へ の heritage 伝 son import line を っ た. 1. Peripheral blood リ ン パ ball へ の heritage 伝 単 nuclear sub import peripheral blood ball よ を り CD4 positive cells, after take リ ン パ ball stimulating factor (IL2, PHA) in the presence of に て beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ お よ び ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ 発 now HIV ベ ク タ ー infection に よ り heritage 伝 son import line を っ た と こ ろ about 0.1% degree の 伝 son Import が possibly であった. Import さ れ た posthumous son 伝 が リ ン パ ball の chromosome に scions into さ れ て い る か の confirm を, ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を hold つ HIV ベ ク タ ー に リ て peripheral blood ン パ ball に heritage 伝 import し, G418 に て sentaku の の cell after DNA を with い て LMPCR (would Mediated PCR) に よ り HIV ベ ク タ ー の chromosome へ の scions into parts of を raised し, salt base with column を decided す る こ と に よ り line っ た. The infection with others の be 験 を リ ン パ ball stimulating factor than the presence of に て line っ た と こ ろ ほ と ん ど heritage 伝 son import は で き な か っ た. 2. Hematopoietic stem cell へ の heritage 伝 import bone marrow cells よ り を CD34 antibody with い て を purification し CD34 positive cells, CD4 heritage 伝 son を hold つ ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を infection さ せ HIV の レ セ プ タ ー で あ る CD4 を 発 now さ せ た after, all kinds of サ イ ト カ イ ン (IL3, IL6, SCF) in the presence of に て beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ お よ び ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ 発 now HIV ベ ク タ ー の infection に よ り posthumous son 伝 import し import working rate の 検 line for を っ た が, beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ お よ び ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ positive cells は ほ と ん ど recognize め ら れ な か っ た. そ の reason と し て, CD34 positive cells の ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に よ る CD4 発 now working rate が low い こ と, cytotoxicity が め ら れ る こ と, お よ び HIV ベ ク タ ー の force 価 が low い こ と が tests such as え ら れ た. In the future, less cytotoxic が な く influence high の い ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー の 発, HIV ベ ク タ ー の force 価 の line up を っ て い く と と も に シ ュ ー ド タ イ プ ベ ク タ ー に よ る heritage 伝 son import も beg の 検 designated で あ る.