ラット蝸牛におけるクラドイドチャンネルのRT-PCR法を用いたクローニング

RT-PCR法克隆大鼠耳蜗枝状通道

• 批准号: 08771377
• 负责人: 大島 猛史
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771377/
• 关键词: クロライドチャンネル; 血管条; 蝸牛; PCR

血管条を含む蝸牛外側壁は、イオンの分泌、吸収が活発に行われ、内耳の内リンパ、外リンパという2つの液性分画の形成に重要であると考えられている。蝸牛外側壁では、多くのイオンチャンネル及び輸送体蛋白質の存在が示唆されてきた。クロライドチャンネルについては、電気生理学的手法により電位非依存性チャンネルの存在が示されているが、電位依存性クロライドチャンネル(CIC)についての研究報告はない。CICは、CIC-1,CIC-2,CIC-3,CIC-4,CIC-5,CIC-K1,CIC-K2の7種類がクローニングされている。今回の研究では、これらCICファミリーを蝸牛外側壁にて同定することを目的とした。内耳組織は細胞数が少ないため、mRNAの検出に感度の高いRT-PCRを用いた。方法:顕微鏡下にラット蝸牛外側壁を取り出し、グラニジンで変性後、オリゴdTセルロースを用いてmRNAを抽出した。逆転写酵素にてcDNAを作製しPCRの鋳型とした。CIC-1,CIC-2,CIC-3に共通の塩基配列を選択しデジェネレートプライマーを合成した。PCR後、ゲルをナイロンフィルターに転写した。各CICに特異なプローブでハイブリダイゼーションを行った。また、PCR産物はプラスミドベクターに挿入後、その塩基配列を確認した。結果及び考察:ラット蝸牛外側壁では、CIC-1は発現せず、CIC-2,CIC-3が検出された。PCR産物の塩基配列を見ると、CIC-2,CIC-3の他にCIC-K1に一致する配列があった。CIC-K1は、従来、腎尿細管の限られた領域にしか発現していないと考えられていたが、今回の研究で蝸牛外側壁にその存在が示されたことは大変興味深い。さらに、in situ hybridizationによる外側壁内での局在を検討中である。

The blood vessel strip contains the outer wall of the snail, the secretion and absorption of the snail's outer wall, and the inner ear of the inner ear.ンパ, 外リンパという2つのliquefied drawing の Formation に であると考えられている. The presence of the snail's outer wall, multi-layered snails, and transporter proteins indicates the presence of snail proteins. The existence of クロライドチャンネルについては, electrophysiological techniques and potential non-dependence Research report on potential dependence and potential dependence of CIC (CIC). There are 7 types of CIC, CIC-1, CIC-2, CIC-3, CIC-4, CIC-5, CIC-K1, and CIC-K2. This time's research is based on the purpose of CIC's outer wall and the snail's outer wall. The number of cells in the inner ear tissue is low, and the sensitivity of mRNA is high, so RT-PCR is used. Methods: Under the microscope, the lateral wall of the snail was extracted and extracted, and the snail was extracted after the extraction of the snail. The enzyme and cDNA are reversely produced and the PCR is typed. CIC-1, CIC-2, and CIC-3 have a common base arrangement and are selected from the same base combination. After PCR, the ゲルをナイロンフィルターに転した was written. Each CIC has its own specific なプローブでハイブリダイゼーションを行った. After inserting the PCR product into the PCR product and confirming the alignment of the base. Result and investigation: The outer wall of the snail was exposed, CIC-1 was exposed, CIC-2, and CIC-3 were exposed. The PCR product has the same base arrangement as CIC-2, CIC-3, and CIC-K1. CIC-K1は、従来、The limit of the renal and urinary tubules is the same as the field of the kidney and urine. The existence of れていたが, and the present study of snail's outer wall are not very interesting.さらに, in situ hybridization による内内 でのbureau in を検同中である.

项目成果

Oshima, T. et al: "Expression of voltage-dependent chloride channels in the rat cochlea" Hearing Research. 103. 63-68 (1997)

Oshima, T. 等人：“大鼠耳蜗中电压依赖性氯离子通道的表达”听力研究。