マクロファージの根充材粒子貪食様式とその細胞骨格のSEM観察

巨噬细胞及其细胞骨架吞噬根部填料颗粒的SEM观察

• 批准号: 08771753
• 负责人: 柵木 智晴
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771753/
• 关键词: 根管充填材; 吸収; マクロファージ; 貪食; 細胞骨格; SEM観察

根管充填時に溢出した材料の排除機構においてマクロファージが重要な役割を果たしていると考えられる。前回までにラット腹腔マクロファージに各種根充用セメント粒子を作用させ、その貪食状態を光学及び走査電子顕微鏡にて確認した。そこで今回、溶解剤としてCHAPSを用いることによりマクロファージの細胞骨格を露出させ走査型電子顕微鏡(SEM)を用い根充用セメントの種類、作用時間の差により貪食状態、貪食様式をより詳細に観察し、比較検討することが今回の目的である。すなわち、4種の代表的な根管充填材を硬化させ、微粒粉砕機にて粉砕し粒子をPBSに懸濁し、超音波槽及び超音波破砕機にて微細化し被検試料を作製した。ラット腹腔よりマクロファージを採取し、FCS加RPMI1640液にて1×10^7Cells/mlに細胞浮遊液を調製し、インキュベートし、マクロファージの付着、伸展を増強するために、PMA(phorbol myristate acetate)処理を施した。その後、マクロファージが付着しているカバーグラスを入れたシャーレに被検試料を注入し、インキュベートした。30.60.120分後に培養液と0.5%CHAPS(RPMI1640)を交換し細胞質を溶解し、細胞骨格を露出した後、マクロファージが付着しているカバーグラスを取りだしグルタールアルデヒド及び四酸化オスミウム溶液にて固定、アルコール系列により脱水、凍結乾燥後、金蒸着し、貪食状態を走査電子顕微鏡にて観察した。貪食させる根充材粒子自体の細胞障害性が高いため、PMA処理を施したにもかかわらず、CHAPSによる細胞質溶解の過程で、細胞が剥離してしまうため、現在、PMA処理、CHAPSの濃度、作用時間などを変更し、実験を継続中である。細胞骨格が安定して確認可能となれば、その後、コンピューターに画像を取り込み根充用セメントの種類、作用時間の差によりそれぞれの貪食様式を比較、検討する予定である。

The removal mechanism of overflow material during root canal filling is important for root canal filling. Previously, the effects of various root-filling media particles on the abdominal cavity were confirmed by optical and electronic microscopy. For this purpose, the type and action time difference of the root filling agent and the gluttonous state and gluttonous mode are examined in detail and compared with each other. Four representative root canal fillings were prepared by hardening, particle powdering, PBS suspension, ultrasonic tank and ultrasonic breaker. The cell suspension solution was prepared by FCS and RPMI1640 solution at 1× 10^7 Cells/ml, and the cell suspension solution was prepared by PMA(phorbol myristate acetate) treatment. After the test, the test sample was injected into the test room. After 30.60.120 minutes, the culture medium and 0.5% CHAPS (RPMI1640) were exchanged, the cytoplasm was dissolved, the cell skeleton was exposed, the culture medium was extracted, the solution was fixed, the series was dehydrated, frozen and dried, the gold was evaporated, and the gluttony state was observed by electron microscope. The cellular damage of the root filling particles themselves was high, PMA treatment was applied, CHAPS was dissolved, cells were separated, PMA treatment, CHAPS concentration, action time were changed, and the effect time was changed. The stability of the cytoskeleton is confirmed by comparing and discussing the gluttony patterns of the root filling agent and the difference in action time.