血管の老化と血漿中プロテオグリカンの質的量的変化

血管老化与血浆蛋白多糖的质量变化

• 批准号: 08772055
• 负责人: 豊田 英尚
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772055/
• 关键词: グリコサミノグリカン; プロテオグリカン; ヘパラン硫酸; コンドロイチン硫酸; 血漿; 血管; 老化; HPLC

まず血漿グリコサミノグリカン(GAG)をプロテオグリカン(PG)として分離する簡便な分画法を確立した.検討の結果,0.1MNaClを含む50mMリン酸緩衝液(PH6.0)で平衡化したDEAE-Sepacelカラムに血漿を直接注入し、1.0MNaClを含む同緩衝液で溶出することによって,カラムベッド量の1/10容までの血漿から定量的に血漿中PGを分画できることが明らかになった.血漿中GAGを分析する前処理法として従来用いられてきた,プロナーゼ消化,エタノール沈殿,CPC沈殿を組み合わせた方法に比べると約50%増のGAGを回収することが可能であったことから,今後の血漿中PGの研究に有効利用されることが期待される.血漿中GAGの大部分は低硫酸化コンドロイチン4硫酸(LSC)であるがその起源物質は明らかにされていない.そこでPG画分から,各種クロマトグラフィーによってLSCプロテオグリカンを精製したところ,細胞増殖因子として最近注目されているインター-α-トリプシンインヒビターであることが明らかになった.さらに加齢との関係を調べるために平均年齢25および60才の健常ヒト血漿100μlを用いて分析した結果,血中濃度はLSCとしていずれも約10ppmであり,質的,量的変化を見いだすことはできなかった.続いて血管と密接な関係が予想される血漿中ヘパラン硫酸の分析を行ったところ、10mlの血漿を痕跡量のヘパラン硫酸(HS)由来不飽和二糖しか検出できないことがわかった.存在濃度は20ppb以下ときわめて微量であり,尿中に1ppm程度のHSが存在することから,尿中HSは血漿由来ではないことが予想された.今後血漿中HSのさらに詳細な分析を継続していく予定である.

A simple method for the separation of plasma from plasma was established. As a result, 0.1 M NaCl buffer solution containing 50mM hydrochloric acid (pH 6.0) was used for equilibration and DEAE-Sepacel solution was directly injected into plasma. 1.0 M NaCl buffer solution was used for dissolution. The amount of PG in plasma was 1/10 of that in plasma. The pre-treatment method for plasma GAG analysis is expected to be useful in future studies of plasma PG. Most of the GAG in plasma is hyposulfated with 4-sulfuric acid (LSC). In addition, the most recent development of cell culture is the development of cell culture, and the most recent development is the development of cell culture. In addition, the relationship between LSC and plasma was adjusted to an average age of 25 to 60 years. The plasma concentration was analyzed by 100μl. The results showed that the concentration of LSC in blood was about 10ppm. The qualitative and quantitative changes were observed. The relationship between blood vessel and blood vessel is considered. The analysis of sulfuric acid in plasma is carried out. The trace amount of sulfuric acid (HS) in plasma of 10ml is determined by unsaturated disaccharide analysis. The concentration of HS in urine is less than 20ppb. In the future, HS in plasma will be analyzed in detail.

项目成果

G.Qui,H.Toyada,T.Toida,I.Koshiishi and T.Imanari: "Compositional analysis of hyaluronan,chondroitin sulfate and dermatan sulfate : HPLC of disaccharides produced from the glycosaminoglycans by solvolysis" Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 44. 1017-1020

G.Qui、H.Toyada、T.Toida、I.Koshiishi 和 T.Imanari：“透明质酸、硫酸软骨素和硫酸皮肤素的成分分析：通过溶剂分解从糖胺聚糖产生的二糖的 HPLC”化学

T.Imanari,T.Toida,I.Koshiishi and H.Toyoda: "High-performance liquid chromatographic analysis of glycosaminoglycan-derived oligosaccharides" Journal of Chromatography A. 720. 275-293 (1996)

T.Imanari、T.Toida、I.Koshiishi 和 H.Toyoda：“糖胺聚糖衍生寡糖的高效液相色谱分析” Journal of Chromatography A. 720. 275-293 (1996)

Y.Huang,Y.Washio,M.Hara,H.Toyoda,I.Koshiishi,T.Toida and T.Imanari: "Simultaneous determination of dermatan sulfate and oversulfated dermatan sulfate in plasma by high-performance liquid chromatography with postcolumn fluorescence derivatization" Analytic

Y.Huang、Y.Washio、M.Hara、H.Toyoda、I.Koshiishi、T.Toida 和 T.Imanari：“柱后荧光衍生化高效液相色谱法同时测定血浆中硫酸皮肤素和过硫酸皮肤素