疾患関連糖鎖遺伝子変異体を用いた分子病態のプロテオーム解析

使用疾病相关聚糖基因变异进行分子病理学蛋白质组分析

基本信息

  • 批准号:
    16012207
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.48万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2004
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2004 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

糖鎖機能の理解はポストゲノム研究における重要課題の一つであるが,糖鎖分析技術の発達が不十分なことや適切なモデル動物が存在しなかったために,核酸やタンパク質に比べて研究が立ち後れているのが現状である.そこで本研究は,疾患関連糖鎖遺伝子変異体を用いた糖鎖の超微量分析法とプロテオーム解析法を検討し,グリコサミノグリカンの機能発現メカニズムの解明を試みると同時に,その情報を応用することによってヒト疾患における遺伝的要因のゲノム解析と分子病態の理解を目指した.ショウジョウバエ全体をすりつぶしてプロテオーム解析を行うことはこれまで非常に困難であった.我々は本研究に先立って様々な条件検討を行いショウジョウバエ試料に適した二次元電気泳動プロトコールを確立していたが,微量の試料を用いて野生型と変異体のプロテオームを比較するためには,さらなる方法の改良が必要であることが判明した.検討の結果,少量液相等電点電気泳動システムによりpH3.0〜pH5.4,pH5.4〜pH6.2,pH6.2〜pH7.0,pH7.0〜pH10.0に分画後,狭域のIPGストリップを用いて等電点電気泳動を行い,二次元電気泳動解析することにより解析が可能になることが明らかになった.また,狭域のIPGストリップを用いた等電点電気泳動を省いて,SDS-PAGEとLC-MSによる,より定量的で再現性の良い方法の有効性も確認できた.これまで,ショウジョウバエのプロテオグリカンのコアタンパク質を生化学的手法で同定した報告例はなかった.そこでまずコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの同定を試みたところ,pH6.2以下の画分に分子量250kDa以上の複数のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンが存在することが明らかになり,現在LC-MSでコアタンパク質を同定中である.
The sugar machine can understand the most important problems in the field of research and development, and the technology of sugar analysis is not very effective. There are significant differences in the presence of chemical substances in the laboratory. Nucleic acid analysis is more sensitive than that after the establishment of the laboratory. In this study, the blood sugar of the disease was analyzed by the method of ultra-microanalysis of glucose, and the analytical method was used to analyze the molecular pathology. in this study, in this study, we used the method of ultramicronutrient analysis of glucose in order to analyze the molecular symptoms of disease. I don't know. I'm sorry. In this study, we first set up the conditions and conditions for the determination of environmental pollution in secondary electrophoretic electrophoresis. in this study, we first set up the conditions for the determination of environmental conditions. in this study, we first set up the conditions for the determination of environmental conditions in this study. in this study, we first set up the conditions for the determination of environmental conditions in this study. in this study, we first set up the conditions for the establishment of environmental conditions in this study. The results show that after the separation of a small amount of liquid phase electrophoretic pH3.0~pH5.4,pH5.4~pH6.2,pH6.2~pH7.0,pH7.0~pH10.0, the narrow-domain IPG electrophoretic system uses the isoelectric point electrophoretic electrophoresis system, and the two-dimensional electrophoretic analysis method can be used to determine the accuracy of the analysis. In a narrow area, IPG electrophoretic activities such as electrophoretic energy saving, SDS-PAGE LC-MS testing, and quantitative reproducibility methods are effective in confirming the performance of electrophoretic devices. The method of biochemistry is the same as that of biochemistry. The concentration of sulfuric acid is lower than that of pH6.2, the molecular weight of 250kDa is higher than that of 250kDa, the molecular weight of sulphuric acid is higher than that of 250kDa, the molecular weight of sulphuric acid is higher than that of sulfuric acid.

项目成果

期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Characterization of heparan sulfate from the unossified antler of Cervus elaphus.
马鹿未骨化鹿角硫酸乙酰肝素的表征。
  • DOI:
    10.1016/j.carres.2004.11.011
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    3.1
  • 作者:
    Ha,YoungWan;Jeon,ByongTae;Moon,SangHo;Toyoda,Hidenao;Toida,Toshihiko;Linhardt,RobertJ;Kim,YeongShik
  • 通讯作者:
    Kim,YeongShik
Approach for functional analysis of glycan using RNA interference
  • DOI:
    10.1023/b:glyc.0000043750.80389.14
  • 发表时间:
    2004-01-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    3
  • 作者:
    Nishihara, S;Ueda, R;Nakamura, M
  • 通讯作者:
    Nakamura, M
Structural characterization of human liver heparan sulfate
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  • 通讯作者:
    秋澤 俊史
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    坂口 裕子;小嶋 絢;豊田 英尚;谷口 将済;小西 元美;秋澤 俊史
  • 通讯作者:
    秋澤 俊史
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    2007
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  • 影响因子:
    0
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  • 通讯作者:
    西脇 清二

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    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)

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