T細胞機能の酸化還元的制御に関わるアミノ酸トランスポーターの同定

鉴定参与 T 细胞功能氧化还原调节的氨基酸转运蛋白

基本信息

批准号：
08772105
负责人：
楯直子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772105/
关键词：
アミノ酸トランスポーター腫瘍細胞

项目摘要

腫瘍細胞に発現の亢進するアミノ酸トランスポーターを同定し、その機能抑制により腫瘍増殖を制御することが可能かどうかを追及することを目的として、腫瘍細胞株を用いたアミノ酸トランスポーターのcDNAクローニングを行った。ヒトテラトカルシノーマ細胞PA-1のcDNAライブラリーを作製し、マウス精巣由来のNa^+依存性中性アミノ酸トランスポーターASCT2をプローブとして240,000個のプラークをスクリーニングすることにより、25個のASCT2と、1個のASCT1を単離した。ヒトpoly(A)^+RNAを用いてノーザンブロットを行ったところ、PA-1においては、ASCT2が、比較的発現の強い腎と比して、極めて強く発現していることが明らかになり、ASCT2が腫瘍細胞に発現の亢進するアミノ酸トランスポータの候補の一つとして位置付けられた。さらに、PA-1からクローニングしたASCT1とASCT2をプローブとしてヒト腫瘍細胞株から抽出したpoly(A)^+RNAを用いてノーザンプロットを行ったところ、肺腺癌RERF-LC-OK、肺小細胞癌RERF-LC-MA、胃指環細胞癌KATOIIIは、ASCT1、ASCT2ともに発現が高く、神経芽細胞腫GOTOにはASCT2の弱い発現が見られ、ASCT1は発現せず、グリオーマKG-1-Cにはともに発現が見られず、メラノーマG-361には、弱いASCT2の発現と極めて強いASCT1の発現が見られた。また同一組織由来で分化度の異なる腫瘍細胞の比較では、ラット肝細胞3'-mRLh-2にはASCT1、ASCT2ともに発現が認められなかったが、肝細胞腫dRLh-84、肝細胞癌FAA-HTC1では、ASCT1のみ強く発現していた。以上の結果より、どのASC型中性アミノ酸トランスポーターが発現するかは腫瘍細胞により異なること、また確かに細胞の腫瘍化とともにASCトランスポーターの発現が亢進することが示された。

为了确定增强肿瘤细胞表达的氨基酸转运蛋白，并追求是否可以通过抑制其功能来控制肿瘤生长，使用肿瘤细胞系的氨基酸转运蛋白的cDNA克隆。制备人畸胎瘤细胞的cDNA文库PA-1，并使用Na^+ - 依赖性的中性氨基酸转运蛋白ASCT2从小鼠睾丸中作为探针，以分离25 ASCT2和一个ASCT1。使用人poly（a）^+RNA的北印迹表明，与相对高度表达的肾脏相比，ASCT2在PA-1中表达极强，并且ASCT2被定位为增强肿瘤细胞表达的候选氨基酸转运蛋白之一。 Furthermore, when Northern plots were performed using poly(A)^+RNA extracted from human tumor cell lines using ASCT1 and ASCT2 cloned from PA-1 as probes, the expression of both ASCT1 and ASCT2 in lung adenocarcinoma RERF-LC-OK, small cell lung carcinoma RERF-LC-MA, and gastric ring cell carcinoma KATOIII was high in both ASCT1 and ASCT2和神经母细胞瘤GOTO表现出ASCT2，NO ASCT1，NO神经胶质瘤KG-1-C和黑色素瘤G-361的表达弱，ASCT2弱且ASCT1表达极强。此外，当比较源自同一组织和不同分化的肿瘤细胞时，在大鼠肝细胞3'-MRLH-2中未观察到ASCT1或ASCT2的表达，但仅ASCT1在肝细胞瘤DRLH-84和肝细胞瘤中强烈表达。以上结果表明，ASC型中性氨基酸转运蛋白的表达取决于肿瘤细胞，并且随着细胞的肿瘤培养，ASC转运蛋白的表达肯定会增加。