アミロイドβペプチドの「老化」によるアルツハイマー病原性変化の解析

β淀粉样肽“衰老”导致阿尔茨海默病致病变化分析

基本信息

批准号：
21K06498
负责人：
楯直子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

加齢に伴い生体内タンパク質を構成するアミノ酸のL-体からD-体への異性化が生じる。アルツハイマー病の病因タンパク質の１つアミロイドβ(Aβ)においても加齢に伴いアスパラギン酸(Asp)のD-体異性化が確認されている。2022年度も引き続きAβ(1-42)においてD-体異性化が確認されている1位、7位、及び23位のAspが異性化したAβの機能特性を解析する研究を継続した。具体的にはD-Asp含有Aβの線維形成促進能（シード能）について解析した。アミロイド線維形成では、既に形成された線維断片が線維核(シード)となって、さらに線維形成を誘導し線維化・凝集が伝播する。野生型Aβ(全アミノ酸L-体)、或いはD-Asp含有Aβより形成した線維を超音波処理することにより断片化して線維形成の核となるシードとし、Aβ単量体に加えた際の線維形成速度をThT-assay法により解析した。その結果、D-Asp23およびD-Asp7,23含有Aβシードは野生型AβシードよりもAβ単量体の線維形成速度を上げ、線維化・凝集を促進することを明らかにした。次に血中で長時間滞留することでAβのD-体異性化が起こることから、生体内で起こるAβのD-体異性化を模した実験系として、Aβの試験管内インキュベーションを行い、その溶液条件に応じて産生するD-Asp含有Aβの分離・解析を行う実験に着手した。試験管内インキュベーション溶液内で産生する各種D-アミノ酸含有異性化Aβをキラルカラムを用いたLC-MS法により、分離する条件検討実験を進めている。各種D-Asp含有Aβを個別に分離できる方法の確立がポイントとなり、個別に分離する条件を決定次第、試験管内Aβインキュベーション溶液の溶液条件に応じて産生した各種D-Asp含有Aβを分離し、得られた各D-Asp含有Aβについて機能特性解析を進めていく方針である。

随着年龄的增长，从L到D到D-异构化构成体内蛋白质的氨基酸异构化发生。天冬氨酸（AP）的D-异构化也已被确认，淀粉样β（Aβ）的年龄是阿尔茨海默氏病的致病蛋白之一。在2022财年，我们继续进行研究以分析Aβ的功能特性，Aβ的功能特性是由ASP在1、7和23位置的异构化，已证实在Aβ（1-42）中已证实D-异构体。具体而言，分析了含D-AP的Aβ促进纤维化（播种能力）的能力。在淀粉样蛋白原纤维形成中，已经形成的原纤维片段成为原纤维核（种子），诱导原纤维形成并传播纤维化和聚集。由野生型Aβ（所有氨基酸L形式）或含D-ASP的Aβ形成的纤维被超声处理碎片，形成一种种子，将成为纤维化的核心，当将纤维化形成速率添加到Aβ单体时，通过THT-assay方法分析了Aβ单体。结果，发现与野生型Aβ种子相比，含D-ASP23和D-ASP7的Aβ种子会增加Aβ单体的纤维化速率并促进纤维化和聚集。接下来，Aβ的D-异构化发生在血液中长期存在时，因此我们开始了一个实验，在该实验中，Aβ在体外孵育，作为一个实验系统，该实验系统模拟了体内发生的Aβ的D-异构化，然后根据该解决方案进行了d-asp contagingAβ的分离和分析。我们目前正在进行一项实验，以检查在体外孵化溶液中产生的各种含D-氨基酸的异构Aβ的条件，使用手性柱通过LC-MS方法分离。关键是建立一种允许各种含D-ASP的Aβ分离的方法，一旦确定了单独分离的条件，将根据体内Aβ孵育溶液的溶液条件产生的各种含D-ASP的Aβ，并将为每个D-APP APP-APP APPAPS EXPER均可分离，并且功能特征分析将被携带。