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ゼラチナーゼAの活性発現・制御機構の解析

明胶酶A活性表达及调控机制分析

基本信息

批准号：
08780564
负责人：
東昌市
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アルツハイマー痴呆症は、脳内に蓄積したβアミロイド蛋白質(βAP)により、神経細胞が変性死することが主要な原因と考えられている。βAPは細胞内でより分子量の大きな細胞膜結合型の前駆体蛋白質(APP)として合成された後、細胞内プロテアーゼにより分解される過程で切り出される。一方、APPが細胞表層において未知のプロテアーゼ(α-secretase)で切断されるとAPPの細胞外領域(sAPP)が切り出され、βAPを産生することはない。私達はこれまでマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の一つであるゼラチナーゼAがα-secretaseとして働く仮説を提唱してきた。本年度はこの仮説を検証するために、培養細胞を用いてsAPPの分泌に及ぼすMMPインヒビターの影響を調べた。1)まず、ヒト繊維肉腫由来HT1080細胞をコンカナバリンA(ConA)で処理すると細胞培養液中のゼラチナーゼA前駆体が活性化されるとともに、sAPP(120kDa)より分子量の低いAPPの分解断片(80〜90kDa)が生じることを見い出した。2)このAPP分離断片は細胞培養液に天然のMMPインヒビターであるTIMP-2や合成MMP阻害剤を添加すると消失した。3)モノクローナル抗体を用いて解析した結果、APP分解断片はsAPPのCOOH末端領域が欠如した分子であることが判明した。4)溶液中でsAPPにゼラチナーゼAを作用させても分解断片を生じないことから、APPの分解は細胞膜表層で起きていると推定された。5)sAPPの分泌はTIMP-2で抑制されないことから、細胞におけるα-secretase活性はMMP以外の酵素が担っていることが示唆された。以上の結果から、当初の予想とは異なり、MMPがα-secretaseとして働く可能性が低いことが示唆された。一方、1)〜4)の結果はα-secretaseに依存しない新しいAPP細胞外領域の放出機構にゼラチナーゼA、あるいはゼラチナーゼA前駆体の活性化因子であるMT-MMPが関わることを示唆している。このMMPによるAPPの細胞外分解経路ではβAP領域内での切断が起きないことから、βAPの産生・蓄積に関与する可能性があり、興味深い。

アルツハイマーDementia, したβアミロイドprotein (βAP ) により, the main reason for the death of the god's cells is えられている. βAP is a cell membrane-bound precursor protein (APP) with a large molecular weight in the cell. After the して synthesizes the された, the しロテアーゼにより decomposes the される process in the cell and cuts out the される. On the one hand, APP's cell surface layer is unknown and is cut off (α-secretase) The extracellular domain of されるとAPP (sAPP) is cut out and βAP is produced.はこれまでマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)の一つであるゼラチナーゼAがα-secretaseとして働く仮说をTi singしてきた. This year, we will talk about the secretion of cultured cells, the secretion of cultured cells and the influence of MMP on the disease. 1) The origin of HT1080 cell sarcoma, ConA, and the treatment of HT1080 cells in ConA cell culture medium. Personalized されるとともに, sAPP(120kDa)よりMolecular weightのlowいAPPのdegradation fragment (80~90kDa)が生じることを见い出した. 2) When the APP separation fragment is added to the cell culture medium and the natural MMP is added, the synthetic MMP inhibitor TIMP-2 is added and disappears. 3) The results of the analysis of the antibody of モノクローナル and the analysis of the APP decomposition fragment and the COOH terminal area of the APP are as follows as the molecule and it is clearly determined. 4) The action of sAPP in the solution is to break down the fragments and produce them.ないことから、APPのdegradationはcell membrane surface layer できているとESTIMATE された. 5) TIMP-2 is secreted by sAPP and inhibits α-secretase activity in cells and enzymes other than MMP. The results of the above are the same, the original thought is different, and the possibility of MMP α-secretase is low and the probability is low. On the one hand, the results of 1) to 4) are dependent on α-secretase and are new in the extracellular domain of APP.チナーゼA, あるいはゼラチナーゼA former activating factor of the body, MT-MMP が Off, わることを Reflects the activating factor of している.このMMP によるAPPの extracellular decomposition 経路ではβAP domain でのcutting がきないことから, βAP のproduction and accumulation, and する possibility があり, deep interest い.