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細胞増殖停止シグナル伝達機構の解明

阐明细胞生长停滞信号转导机制

基本信息

批准号：
08780682
负责人：
立石智
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780682/
关键词：
アポトーシス細胞周期変異株

项目摘要

血清除去により過剰な細胞死を示すCHO細胞変異株を25株分離した。それらは低血清条件で野生株に比べて約40倍近い生存率であり、またアポトーシスの特徴をしめした。FACSによる解析により、変異株では細胞周期の停止が不完全であるために細胞死をひきおこすことがわかった。またDNAに傷害を与える条件では細胞周期が停止しないため、8倍体細胞が蓄積した。10%血清存在下では、野生株に比べて約1.5倍はやい増殖率をしめし、これは主にG1期が短縮しているためと判明した。放射能で標識されたチミジンの取り込みを調べたところ、DNA合成速度が上昇していた。分離したすべての変異株は高い増殖率を示した事から、細胞周期を調節する遺伝子に変異があるため、増殖を抑制させるシグナルを伝達する時にアポトーシスを誘導する様になったと推測される。変異株は抗がん剤に対して強い感受性を示したので、この性質を指標として相補性テストをおこなった。野生株とそれぞれの変異株を融合して薬剤耐性を調べた結果、7株が野生株に対して優性であり、10株が劣性であった。次に劣性を示す変異株どうしを融合して薬剤耐性を調べた結果、少なくとも3種類の相補性群に分類される事が判明した。変異株の原因遺伝子をクローニングするため、ジェノミッククローニングをおこなっている。変異株は抗がん剤の一種にたいして強い感受性をしめすが、ヒト由来のDNAを導入することにより耐性の細胞株が得られる。現在この耐性株を用いてジェノミックDNAクローンを分離する計画である。変異株のc-myc遺伝子の発現抑制やRB蛋白質のリン酸化抑制がおきているかについては現在解析中である。

25 strains of CHO cells were isolated after serum removal. The survival rate of wild plants under low serum conditions is about 40 times higher than that of wild plants. FACS analysis of cell cycle is incomplete. DNA damage and conditions are not cell cycle stops, octaploid cells accumulate In the presence of 10% serum, the growth rate of the wild strain was about 1.5 times that of the wild strain, and the G1 phase of the wild strain was shortened. The radioactive marker is selected from the group consisting of the following components: The results showed that the cell cycle was regulated by the high growth rate of the mutant plants. The strong sensitivity of different plants to resistance is demonstrated, and this property serves as an indicator and a complementary factor. 7 wild plants were superior and 10 wild plants were inferior. The results of the adjustment of the three types of complementary groups were identified. The origin of the mutant plant is called the root cause of the disease. A resistant cell line was obtained by introducing DNA into the mutant strain. Now the resistant strains are isolated using the same method. Inhibition of c-myc gene development and RB protein acidification in different strains