神経回路形成に関わるラミニン様細胞外基質の同定と機能解析

参与神经回路形成的层粘连蛋白样细胞外基质的鉴定和功能分析

• 批准号: 08780741
• 负责人: 永野 隆
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780741/
• 关键词: 神経回路成熟; シナプス蛋白; 遺伝子クローニング

本研究は、発達時期の異なる脳シナプス膜画部を用いて作成した2種の抗体で脳の遺伝子発現ライブラリーを差分スクリーニングし、神経回路の形成・成熟に関わる新たな蛋白の遺伝子を得ようとするものである。実験は(1)スクリーニングに用いる抗体の作製、(2)遺伝子発現ライブラリーの準備、(3)抗体を用いたライブラリーのスクリーニング、(4)遺伝子の単離とその構造(塩基配列)の解析、(5)遺伝子産物(蛋白)の機能の解析の5段階に大別され、8年度は(3)・(4)を中心に実施した。生後1日目のラット脳シナプス膜画分由来の抗体および生後90日由来の同様の抗体を用いて、生後90日ラット脳より作製した遺伝子発現ライブラリー5×10^5クローンをスクリーニングした。生後1日由来の抗体より生後90日由来の抗体と強く反応する93クローンを選び出してそれぞれの塩基配列を調べたところ、シナプシンIb、シナプトフィジン、MAPIA、ホスホニューロプロテイン、ジィンクフィンガー蛋白等の既知遺伝子とともに4クローン3種類の未知遺伝子が同定された。ノーザン解析を行ったところ、その3種の未知遺伝子mRNAはそれぞれ約9.5Kb・3.5Kb・3.2Kb大きさであった。引き続いてその3種類の未知遺伝子cDNAの全長を得るべくスクリーニングを行っており、これまでに3種のうち後2者の遺伝子についてはほぼ全長のクローニングに成功した。約9.5Kbの大きさの未知遺伝子についてもcDNA全長を得るべく研究を続けている。

In this study, two kinds of antibodies were prepared according to the different development stages and the different development stages, and the new protein gene was obtained according to the different development stages and the different development stages. The results include: (1) preparation of antibody for use in gene expression;(2) preparation of gene expression vector;(3) preparation of gene expression vector;(4) analysis of gene structure (gene alignment);(5) analysis of gene product (protein) function in five stages; and (3) preparation of gene expression vector in eight years. 1 day after birth and 90 days after birth, the same type of antibody was used, and 90 days after birth, the same type of antibody was used. Antibodies from day 1 of life, antibodies from day 90 of life, antibodies from day 3 of life, antibodies from day 4 of life, antibodies from day 9 of life, antibodies from day The mRNA of three unknown genes was analyzed by PCR and was about 9.5Kb·3.5Kb·3.2Kb. The full length cDNA of 3 kinds of unknown genes was successfully obtained. About 9.5 Kb of DNA was obtained from the cDNA of unknown gene.