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固定化凝集性酵母を活用した高効率酵素生産およびバイオコンバージョン

使用固定化絮状酵母进行高效酶生产和生物转化

基本信息

批准号：
09750840
负责人：
近藤昭彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

酵素を生体触媒として利用していく上で、簡便かつ安価に大量生産する手法の確立が望まれている。本研究では、酵素を高レベルで分泌生産するとともに、凝集性を示す酵母系を確立し、多孔質体の細胞保持粒子(BSPs)への固定化培養法(連続およびDraw and Fill培養法)を確立することで、効率的な酵素生産システムを構築することを試みた。酵母としては、強い凝集性を示し、遺伝子組換えのホストとしても優れているS.diastaticus(ATCC60715)を用いた。また、BSPsとしては、細孔径の異なる6mm角の各種ポリウレタンフォームを用い、以下の様な結果を得た。1) 凝集性酵母S.diastaticusの固定化においては、細孔径が50ppiのBSPsが固定化に適していた。特にDraw and Fill培養法においては、15-20mg-dry cell/BSP程度の高い菌体固定化密度が維持されることが明らかとなった。また、BSP内の形態観察を顕微鏡で行ったところ、BSP内部まで、密に菌体が固定されていることが明らかとなった。2) 凝集性酵母S.diastaticusを各種遺伝子操作におけるホストとして利用するために、四分子解析法を用いて、各種栄養要求性マーカーを付与した株を構築した。3) BSPsに固定化された凝集性酵母S.diastaticusは、Draw and Fi11培養において、繰り返し酵素を効率よく分泌生産できることが明らかとなった。4) 凝集性酵母S.diastaticusの細胞壁の透過性を上げるためにアルコール処理を行った。アルコール処理は、細胞内の酵素を漏出させることなく、酵素基質・生産物の透過性を著しく向上させるため、高活性whole cell biocatalysts調製法として有効であることが、明らかとなった。

The enzyme biocatalyst is used to make sure that you are looking at it through the use of a large number of drugs. In this study, enzyme production, enzyme production, agglutination test, cell retention particle retention (BSPs) and immobilization culture (Draw and Fill culture) were used to determine the enzyme production rate. Yeast enzyme, agglutination assay and subgroup assay were used to detect S.diastaticus (ATCC60715). BSPs, BSPs, and 6mm corners are used for all kinds of equipment, and the following results are successful. 1) the immobilization of agglutinating yeast S.diastaticus, the immobilization of pore diameter, the BSPs of 50ppi, the immobilization of yeast. Special draw and Fill culture method was used to improve the immobilization density of bacteria at 15-20mg-dry cell/BSP level. The morphology of the BSP, the microphone, the BSP, the bacteria, the bacteria, the 2) the agglutinative yeast S.diastaticus was used in the operation of each yeast. The agglutinative yeast was used by four-molecule analytical method, and all kinds of yeast were paid to the strain by molecular analysis. 3) BSPs immobilization, agglutination yeast S.diastaticus, Draw and Fi11 culture, enzyme recovery rate, secretion rate, enzyme secretion rate and enzyme secretion rate. 4) the cell wall permeability of agglutinative yeast S.diastaticus yeast was analyzed. The leakage of intracellular enzymes, the permeability of enzyme-based metabolites, high-activity whole cell biocatalysts assay, the leakage of intracellular enzymes, the leakage of enzymes, the leakage of intracellular enzymes and the permeability of enzyme-based products were detected by high-activity PCR.