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分子シャペロンを活用したタンパク質再生反応・分離プロセスの開発

利用分子伴侣开发蛋白质再生反应和分离工艺

基本信息

批准号：
07750853
负责人：
近藤昭彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子工学的に大量生産されたタンパク質は立体構造が形成できずに、不溶性顆粒となる場合が多い。本研究では、タンパク質の立体構造形成を促進する触媒である分子シャペロンを大量に生産し、これを使って不溶性顆粒となったタンパク質から、正しい立体構造を持ち、活性のあるタンパク質を再生させる反応システムを構築することを目的とした。分子シャペロンとしては、大腸菌由来のGroEL/ESを用いた。まず、GroEL/ESを発現用プラスミドに組み込み、大腸菌DH5αにおいて大量発現を行った。GroEL/ESは、カゼイン固定化カラムを使用することで、高純度アフィニティ分離できた。これを用いて、グアニジン変性および熱変性させた酵素(エノラーゼ、DNAse、α-アミラーゼ)の再生反応特性を検討した。その結果、(1)GroEL/ESはATP存在下で再生反応を行う、(2)変性タンパク質に対してモル比で2倍以上のGroEL/ESを加えれば高い再生率を達成できる、(3)再生反応は37℃近傍で最も効率良く進行する、(4)タンパク質濃度を上げてもそれに応じてGroEL/ES量を増加させることで高い再生率を達成できる、(5)37℃以下ではGroEL/ESは安定である、などが明らかになった。そこで、GroEL/ESを活用した再生反応プロセスとして、(1)GroEL/ESをセルロースゲルに固定化して(Formyl-Cellulofineを利用)使用する、(2)再生反応後にGroEL/ESを固定化カゼインによりアフィニティ分離し再生利用する、の二つについて検討した。いずれの場合も、十分な活性を保ちながら繰り返し再生反応が行えるとともに、再生酵素を分離できたことから、その有効性が明かとなった。

There are a large number of products in the science of engineering, such as the formation of a large number of particles, the formation of insoluble particles, and the combination of particles. The purpose of this study is to promote the formation of stereoscopic devices, to promote the production of a large number of molecules in the presence of catalysts, to increase the production of insoluble particles, to increase the concentration of insoluble particles, to increase the formation of solid particles, to increase the formation of solid materials, to promote the formation of stereoscopic devices, to promote the formation of molecules, and to increase the number of insoluble particles. Molecular antifungal agents are known as GroEL/ES fungus, and bacteria are used as antifungal agents. There are a large number of real-time products such as DH5 α and DH5 α, which are commonly used in clinical practice. GroEL/ES, high temperature, high temperature, The enzyme (DNAse, alpha-phenylethyl, alpha-phenylethyl) was used to regenerate the properties of the enzyme. The results were as follows: (1) in the presence of GroEL/ES ATP, (2) the rate of regeneration was more than 2 times higher than that of GroEL/ES, and (3) the optimal rate of regeneration was improved at 37 ℃. (4) High regeneration rate (GroEL/ES), (5) GroEL/ES diazepam (below 37 ℃), and so on. After the active use of GroEL/ES and GroEL/ES, (1) the use of GroEL/ES, (1) the separation of regeneration, (1) the use of immobilization, (2) the use of regeneration, separation, separation and separation, respectively. The activity is very high, the activity is 10%, the activity is 10%, the activity is 10%.