腸球菌におけるペプチドフェロモン−リセプター−DNA三分子間相互作用の解析

肠球菌肽信息素-受体-DNA三元相互作用分析

• 批准号: 09760112
• 负责人: 中山 二郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760112/
• 关键词: 腸球菌; ペプチド性フェロモン; プラスミド; 受容体; DNA結合タンパク質

腸球菌Enterococcus faecalisのバクテリオシンプラスミドpPD1の接合伝達は受容菌の分泌するペプチド性フェロモンの一つであるcPD1により活性化され、供与菌自身が分泌するiPD1により停止される。これまでにcPD1は受容菌細胞内に取り込まれpPD1にコードされる38kDaの細胞内受容体タンパク質TraAに結合することが示されている。本研究はTraAによるcPD1のシグナル変換の分子機構を明らかにすることを目的としている。まず、大腸菌によりN端末にGSTを付加したGST-TraAを過剰発現させた。スキャッチャード解析において、GST-TraAはcPD1に対し0.13nMの解離定数を示した。この値は、cPD1が生理作用を示す最小濃度にほぼ一致していることから、TraAがフェロモンに対する直接的なセンサーとして働いていることが示唆された。iPD1存在化でのスキャッチャード解析においては、結合サイト数は変化しないが、解離定数が増加することから、iPD1はフェロモンに対するアンタゴニストであることが判明した。またGST-TraAは他のプラスミドに対するフェロモンおよびインヒビターには全く結合能を示さなかった。このことよりTraAは自己のプラスミドに対するフェロモンおよびインヒビターに対して完全に特異的であることを示している。フェロモンに対してC末端44アミノ酸残基を欠くGST-TraAはフェロモンに対する結合能を示さないことからC末端44アミノ酸残基がフェロモン結合部位はこのC末端領域に存在することが示唆された。またゲルシフトアッセイによりTraAがインヒビター遺伝子のプロモーター上流域に結合することが示された。TraAはこのインヒビター遺伝子領域のmRNAの発現調節を行うことによりフェロモンのシグナルを伝達していると考えられる。

Enterococcus faecalis is a species of bacteria that produces pPD1, which is secreted by the host bacteria. The pPD1 is activated and secreted by the host bacteria. The pPD1 receptor is a 38kDa intracellular receptor that binds to a protein called TraA. The purpose of this study is to clarify the molecular mechanism of cPD1 in TraA. Also, GST-TraA was announced with the addition of GST at the end of the N terminal for coliforms. GST-TraA shows the dissociation constant of 0.13 nM for cPD1. The value of cPD1 is shown in the minimum concentration of cPD1. iPD1 exists, and the number of binding sites changes, and the number of dissociation sites increases. iPD1 exists, and the number of binding sites increases. The GST-TraA is a combination of the following: This is the first time that a person has ever been involved in an activity that is completely different from his own. GST-TraA binding energy for C-terminal 44 amino acid residues is shown in the binding site for C-terminal 44 amino acid residues. The first step is to create a network of mobile devices. TraA gene expression regulation in the gene expression domain

项目成果

Jiro Nakayama: "Gnetic analys is of plasmid-specific signaling by pPD1 in Enterococcus faecalis" Biosci.Biotech.Biochem.61(11). 1796-1799 (1997)

Jiro Nakayama：“遗传分析是粪肠球菌中 pPD1 的质粒特异性信号传导”Biosci.Biotech.Biochem.61(11)。

Jiro Nakayama: "Analysis of pheromone binding and pheromone reception by Enterococcus faecalis" Streptococci and the host. 418. 1033-1035 (1997)

中山二郎：“粪肠球菌信息素结合和信息素接收分析”链球菌和宿主。

Jiro Nakayama: "Moleculan mechanism of peptide-specific pheromone signaling in Enterococcus faecalis:Function of pheromone receptor TraA and pheromone-binding protein TraC encod by pPD1" Journal of Bactericlogy. 180(3). 449-456 (1998)

Jiro Nakayama：“粪肠球菌中肽特异性信息素信号传导的分子机制：pPD1 编码的信息素受体 TraA 和信息素结合蛋白 TraC 的功能”《细菌学杂志》。