プラスミド接合伝達活性化ペプチド"細菌の性フェロモン"の受容認識機構

质粒接合转移激活肽“细菌性信息素”的接收识别机制

• 批准号: 07760114
• 负责人: 中山 二郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760114/
• 关键词: Enterococcus faecalis; ペプチドフェロモン; プラスミド; シグナル伝達; tra遺伝子; 部位特異的変異導入; ラジオラベルフェロモン; トリーサー実験

本研究では、腸球菌Enterococcus faecalisの性フェロモン応答性接合伝達プラスミドにコードされる、フェロモンの認識およびシグナル伝達機構を分子構造レベルで解明することを最終目標とし研究し、以下の二研究を行った。(1)性フェロモンのシグナル伝達の遺伝的解析性フェロモンのシグナル伝達に関与していると思われる領域には、複数のタンパク質(tra遺伝子産物)がコードされている。本研究では、相同組換えによる変異導入法を用い、個々のtra遺伝子に変異を導入し、個々の遺伝子が性フェロモンのシグナル伝達にどのような役割を果たしているかを解析した。その結果、フェロモンの生産を制御するフェロモンシャットダウン遺伝子traB、フェロモンに対する感受性を担うtraC、およびフェロモン応答のネガティブレギュレーターtraA遺伝子を同定できた。それらの変異を掛け合わせることにより、それらの性フェロモンシグナリングにおける上流、下流の相対的位置付けを行なった結果、traB-traC-traAの順に位置付けされた。(2)フェロモンの追跡実験追跡実験用にまずフェロモンのラジオアイソトープラベルを試みた。フェロモンの一種cAM373のN末端アラニンをチロシンに変換しそのチロシン残基に^<125>Iを導入したフェロモンアナログは、供与菌に投与すると短時間に分解され、このアナログは、フェロモンの追跡実験には不適当であることが判明した。そこで次に他種フェロモンcPD1のロイシン残基に接触還元を用いてトリチウムを導入した。この^3H-cPD1は供与菌細胞表層に特異的に結合した。現在、このラベルフェロモンを用いた追跡実験をさらに進めている。

In this study, we investigated the final goal of elucidating the recognition and signaling mechanisms of pheromones encoded by the sex pheromone-responsive junctional plasmid of Enterococcus faecalis at the molecular structure level, and conducted the following two studies: (1) Genetic analysis of sex pheromone signaling Multiple proteins (tra gene products) are encoded in the region that is thought to be involved in sex信息素信号传导。在这项研究中，使用同源重组将突变引入单个TRA基因中，并分析了单个基因在性信息素信号传导中的作用。结果，我们能够鉴定信息素的基因TRAB，该基因TRAB控制着信息素的产生，TRAC，该TRAC负责对信息素的敏感性，而TRAA基因是信息素响应的负调节剂。通过乘以这些突变，进行了上游和下游性信息素信号的相对定位，从而导致Trab-Trac-Traa的顺序。 （2）信息素跟踪实验首先，尝试跟踪信息素的放射性同位素标记。信息素类似物将信息素型CAM373的N末端丙氨酸转化为酪氨酸，并将 ^<125> i引入其酪氨酸残留物中，在短时间内降级到供体细菌时，该模拟物被发现不适合适合适应性的追踪实验。因此，然后使用催化性还原引入Tritium，将Tritium引入其他信息素CPD1的亮氨酸残基中。该 ^3H-CPD1特别结合到供体细胞的表面。当前，正在进行使用此标记的信息素的进一步追求实验。

项目成果

森地敏樹ら: "乳酸菌の科学と技術" 学会出版センター, 340 (1996)

Toshiki Morichi 等：《乳酸菌科学与技术》学会出版中心，340（1996）

J. Nakayama et al.: "Isolation and Structure of the sex pheromone inhibitor, iAM373, of Enterococcus faecalis" Biosci. Biotech. Biochem.59. 1358-1359 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌性信息素抑制剂 iAM373 的分离和结构”Biosci。

J. Nakayama et al.: "Cloning and characterization of a region of Enterococcus faecalis plasmid pPD1 encoding pheromone inhibitor (ipd), pheromone sensitinty (traC), and pheromone shutdown genes" J. Bacteriol.177. 5567-5573 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌质粒 pPD1 编码信息素抑制剂 (ipd)、信息素敏感性 (traC) 和信息素关闭基因区域的克隆和表征”J. Bacteriol.177。

J. Nakayama et al.: "Isolation and Structure of the Enterococcus faecalis sex pheromone cOB1, that induces conjugal transfer of the hemalysin/bacteriocin plasmids, pOB1 and pY." Biosci. Biotech. Biochem.59. 703-705 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌性信息素 cOB1 的分离和结构，可诱导溶血素/细菌素质粒 pOB1 和 pY 的接合转移。”

J. Nakayama et al.: "Quantitative analysis for pheromone inhibitor and pheromone shutdown in Enterococeus faecalis" Genetics Stveptococei, Enterococci and Lactococci. 35-38 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌中信息素抑制剂和信息素关闭的定量分析”遗传学 Stveptoccei、肠球菌和乳球菌。