プラスミド接合伝達活性化ペプチド"細菌の性フェロモン"の受容認識機構

质粒接合转移激活肽“细菌性信息素”的接收识别机制

• 批准号: 07760114
• 负责人: 中山 二郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760114/
• 关键词: Enterococcus faecalis; ペプチドフェロモン; プラスミド; シグナル伝達; tra遺伝子; 部位特異的変異導入; ラジオラベルフェロモン; トリーサー実験

本研究では、腸球菌Enterococcus faecalisの性フェロモン応答性接合伝達プラスミドにコードされる、フェロモンの認識およびシグナル伝達機構を分子構造レベルで解明することを最終目標とし研究し、以下の二研究を行った。(1)性フェロモンのシグナル伝達の遺伝的解析性フェロモンのシグナル伝達に関与していると思われる領域には、複数のタンパク質(tra遺伝子産物)がコードされている。本研究では、相同組換えによる変異導入法を用い、個々のtra遺伝子に変異を導入し、個々の遺伝子が性フェロモンのシグナル伝達にどのような役割を果たしているかを解析した。その結果、フェロモンの生産を制御するフェロモンシャットダウン遺伝子traB、フェロモンに対する感受性を担うtraC、およびフェロモン応答のネガティブレギュレーターtraA遺伝子を同定できた。それらの変異を掛け合わせることにより、それらの性フェロモンシグナリングにおける上流、下流の相対的位置付けを行なった結果、traB-traC-traAの順に位置付けされた。(2)フェロモンの追跡実験追跡実験用にまずフェロモンのラジオアイソトープラベルを試みた。フェロモンの一種cAM373のN末端アラニンをチロシンに変換しそのチロシン残基に^<125>Iを導入したフェロモンアナログは、供与菌に投与すると短時間に分解され、このアナログは、フェロモンの追跡実験には不適当であることが判明した。そこで次に他種フェロモンcPD1のロイシン残基に接触還元を用いてトリチウムを導入した。この^3H-cPD1は供与菌細胞表層に特異的に結合した。現在、このラベルフェロモンを用いた追跡実験をさらに進めている。

This study で は, Enterococcus Enterococcus faecalis の sex フ ェ ロ モ ン 応 a sexual joint 伝 da プ ラ ス ミ ド に コ ー ド さ れ る, フ ェ ロ モ ン の know お よ び シ グ ナ ル 伝 of institutions を molecular structure レ ベ ル で interpret す る こ と を ultimate goal と し line study し, the following の を っ た. (1) フ ェ ロ モ ン の シ グ ナ ル 伝 da の but 伝 analyticity フ ェ ロ モ ン の シ グ ナ ル 伝 da に masato and し て い る と think わ れ る field に は, plural の タ ン パ ク mass (tra heritage 伝 zi chan) が コ ー ド さ れ て い る. This study で は, the same group in え に よ る - を い, a different import method 々 の tra heritage 伝 son に - different を import し, a 々 の posthumous son 伝 が sex フ ェ ロ モ ン の シ グ ナ ル 伝 da に ど の よ う な "を cut fruit た し て い る か を parsing し た. そ の results, フ ェ ロ モ ン の production を suppression す る フ ェ ロ モ ン シ ャ ッ ト ダ ウ ン heritage 伝 traB, フ ェ ロ モ ン に す seaborne る susceptibility を bear う traC, お よ び フ ェ ロ モ ン 応 answer の ネ ガ テ ィ ブ レ ギ ュ レ ー タ ー traA heritage 伝 son を be で き た. そ れ ら の - different を hang け close わ せ る こ と に よ り, そ れ ら の sex フ ェ ロ モ ン シ グ ナ リ ン グ に お け る high-class, obscene の facies dominated position pay け を line な っ た results, traB - traC - traA の shun に position pay け さ れ た. (2)フェロモ <e:1> the tracking experiment can be traced using にまずフェロモ <e:1> ラジ ア ア ソト プラベ プラベ を を を to test みた. A cAM373 フ ェ ロ モ ン の の N terminal ア ラ ニ ン を チ ロ シ ン に variations in し そ の チ ロ シ ン residues に ^ < 125 > I を import し た フ ェ ロ モ ン ア ナ ロ グ は, supply and bacteria were に and す る と に short time decomposition さ れ, こ の ア ナ ロ グ は, フ ェ ロ モ ン の tracing be 験 に は inappropriate で あ る こ と が.at し た. そ こ に で times he フ ェ ロ モ ン cPD1 の ロ イ シ ン residues に contact yuan を also use い て ト リ チ ウ ム を import し た. The <s:1> <s:1> ^3H-cPD1 に is used to bind to the に specific に on the surface layer of the bacterial cell, which is た た. Now, <s:1> ラベ フェロモ フェロモ を を use the た た tracing experiment をさらに into めて る る.

项目成果

森地敏樹ら: "乳酸菌の科学と技術" 学会出版センター, 340 (1996)

Toshiki Morichi 等：《乳酸菌科学与技术》学会出版中心，340（1996）

J. Nakayama et al.: "Isolation and Structure of the sex pheromone inhibitor, iAM373, of Enterococcus faecalis" Biosci. Biotech. Biochem.59. 1358-1359 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌性信息素抑制剂 iAM373 的分离和结构”Biosci。

J. Nakayama et al.: "Cloning and characterization of a region of Enterococcus faecalis plasmid pPD1 encoding pheromone inhibitor (ipd), pheromone sensitinty (traC), and pheromone shutdown genes" J. Bacteriol.177. 5567-5573 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌质粒 pPD1 编码信息素抑制剂 (ipd)、信息素敏感性 (traC) 和信息素关闭基因区域的克隆和表征”J. Bacteriol.177。

J. Nakayama et al.: "Quantitative analysis for pheromone inhibitor and pheromone shutdown in Enterococeus faecalis" Genetics Stveptococei, Enterococci and Lactococci. 35-38 (1995)

J. Nakayama 等人：“粪肠球菌中信息素抑制剂和信息素关闭的定量分析”遗传学 Stveptoccei、肠球菌和乳球菌。

J. Nakayama et al.: "Targeted disruption of the PD78 gene (traF) reduces pheromone-inducible conjigal Transfen of the bacteriocin plasmid pPD1 in Enterococcus faecalis" FEMS Microboil・Left.128. 283-288 (1995)

J. Nakayama 等人：“PD78 基因的靶向破坏 (traF) 减少了粪肠球菌中细菌素质粒 pPD1 的信息素诱导性结合转移”FEMS Microboil·Left.128 (1995)。