低温地域に特化した持続的グルコース生産システムの創成

创建针对低温地区的可持续葡萄糖生产系统

• 批准号: 22K05939
• 负责人: 堀内 正隆
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05939/
• 关键词: ハイブリッド酵素; セルラーゼ; セルロース; 好冷菌; タンパク質工学; グルコース生産; 結晶性セルロース

令和4年度は、低温型ハイブリッドセルラーゼの酵素ユニットのうち、Sclerotinia borealisの溶解性多糖モノオキシゲナーゼ (sbLPMO) について、大腸菌、Pichia pastorisおよびBrevibacillusを宿主とした発現を試みた。S. borealisには3種類のLPMO候補遺伝子が存在していたため、それらをすべて発現ベクターにクローニングした。大腸菌では、組換えタンパク質はすべて不溶性画分として得られたことから、複数の条件下での可溶化やリフォールディングを試みたが、活性のある可溶化酵素は得られなかった。Pichia pastorisにおいては、そもそも目的タンパク質の発現を確認できなかった。これらに対し、Brevibacillusでは、2種類のsbLPMO遺伝子について、培地画分に組換えタンパク質が確認された。発現したsbLPMOは、C末端側に付加したHis-tagを利用して、Niキレートカラムによるアフィニティー精製した。過酸化水素の存在下で、得られたsbLPMOのうちの1種類について2,6-ジメトキシフェノールの分解活性を調べたところ、pH 8のときに最大の活性を示すことが明らかとなった。その他に、新規の酵素ユニットとして、S. borealisのセロビオースデヒドロゲナーゼ (sbCDH) のクローニングを行った。ただし、sbCDHの塩基配列は、データベース上のゲノムベースの配列とは異なる部分が複数存在することから、現在、他の種のCDHとの配列比較を行い、sbCDHの塩基配列の妥当性について検討している。

Make annual は, low temperature and 4 type ハ イ ブ リ ッ ド セ ル ラ ー ゼ の enzyme ユ ニ ッ ト の う ち, Sclerotinia borealis の soluble polysaccharide モ ノ オ キ シ ゲ ナ ー ゼ (sbLPMO) に つ い て, coliform, Pichia pastorisおよびBrevibacillusを host と た た occurrence を test みた. S. borealis に は 3 kinds の LPMO alternate heritage 伝 son が exist し て い た た め, そ れ ら を す べ て 発 now ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し た. Coliform で は, group in え タ ン パ ク qualitative は す べ て insoluble draw points と し て have ら れ た こ と か ら, under the condition of complex の で の solubilization や リ フ ォ ー ル デ ィ ン グ を try み た が, active の あ る can dissolve enzyme は ら れ な か っ た. Pichia pastoris に お い て は, そ も そ も purpose タ ン パ ク qualitative の 発 を now confirmed で き な か っ た. こ れ ら に し, seaborne Brevibacillus で は, 2 species の sbLPMO posthumous son 伝 に つ い て, pei to draw points に group in え タ ン パ ク qualitative が confirm さ れ た. 発 now し た sbLPMO は, C terminal side に plus し た ihs - tag を using し て, Ni キ レ ー ト カ ラ ム に よ る ア フ ィ ニ テ ィ ー refined し た. A で, and in the presence of acidic water element の ら れ た sbLPMO の う ち の 1 species に つ い て 2, 6 - ジ メ ト キ シ フ ェ ノ ー ル の decomposition activity を adjustment べ た と こ ろ, pH 8 の と き に biggest の active を shown す こ と が Ming ら か と な っ た. に そ の him, new rules の enzyme ユ ニ ッ ト と し て, s. borealis の セ ロ ビ オ ー ス デ ヒ ド ロ ゲ ナ ー ゼ (sbCDH) の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. た だ し, sbCDH の salt base with は, デ ー タ ベ ー ス on の ゲ ノ ム ベ ー ス の match column と は different な る part が plural exist す る こ と か ら, now, he の の CDH と の line column is を い, sbCDH の salt base with column の justice に つ い て beg し 検 て い る.

项目成果

Development of the crystalline cellulose degradation system consisting of the psychrophilic fungus-type hybrid enzymes

由嗜冷真菌型杂合酶组成的结晶纤维素降解系统的开发

• 发表时间: 2020
• 作者: Masataka Horiuchi;Shiro Kuninaga;Izumi Saito;Masato Katahira;Takashi Nagata
• 通讯作者: Takashi Nagata

オッセオインテグレーション関連因子を用いたインプラント周囲骨再生治療の開発

利用骨整合相关因子开发种植体周围骨再生治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 堀内留美;堀内正隆;横山敦郎
• 通讯作者: 横山敦郎

構造解析のための FGF5 と aptamer の調製

FGF5和适体的制备用于结构分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 植草 友也;笹生 みなみ;天野 亮;行方 昌人;堀内 正隆;柳澤 拓也;西本 翔;田中 陽一郎;Farhana Ishrat Ghani;山本 昌邦;坂本 泰一
• 通讯作者: 坂本 泰一

線維芽細胞増殖因子FGF5に対するAptamerの開発

成纤维细胞生长因子FGF5适体的开发

• 发表时间: 2022
• 作者: Jo Michiko;Koizumi Keiichi;Suzuki Mizuho;Kanayama Daisuke;Watanabe Yurie;Gouda Hiroaki;Mori Hisashi;Mizuguchi Mineyuki;Obita Takayuki;Nabeshima Yuko;Toyooka Naoki;Okada Takuya;天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一
• 通讯作者: 天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一