低温地域に特化した持続的グルコース生産システムの創成

创建针对低温地区的可持续葡萄糖生产系统

• 批准号: 22K05939
• 负责人: 堀内 正隆
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05939/
• 关键词: ハイブリッド酵素; セルラーゼ; セルロース; 好冷菌; タンパク質工学; グルコース生産; 結晶性セルロース

令和4年度は、低温型ハイブリッドセルラーゼの酵素ユニットのうち、Sclerotinia borealisの溶解性多糖モノオキシゲナーゼ (sbLPMO) について、大腸菌、Pichia pastorisおよびBrevibacillusを宿主とした発現を試みた。S. borealisには3種類のLPMO候補遺伝子が存在していたため、それらをすべて発現ベクターにクローニングした。大腸菌では、組換えタンパク質はすべて不溶性画分として得られたことから、複数の条件下での可溶化やリフォールディングを試みたが、活性のある可溶化酵素は得られなかった。Pichia pastorisにおいては、そもそも目的タンパク質の発現を確認できなかった。これらに対し、Brevibacillusでは、2種類のsbLPMO遺伝子について、培地画分に組換えタンパク質が確認された。発現したsbLPMOは、C末端側に付加したHis-tagを利用して、Niキレートカラムによるアフィニティー精製した。過酸化水素の存在下で、得られたsbLPMOのうちの1種類について2,6-ジメトキシフェノールの分解活性を調べたところ、pH 8のときに最大の活性を示すことが明らかとなった。その他に、新規の酵素ユニットとして、S. borealisのセロビオースデヒドロゲナーゼ (sbCDH) のクローニングを行った。ただし、sbCDHの塩基配列は、データベース上のゲノムベースの配列とは異なる部分が複数存在することから、現在、他の種のCDHとの配列比較を行い、sbCDHの塩基配列の妥当性について検討している。

In the fourth year of this year, the development of soluble polysaccharide (sbLPMO), Escherichia coli, Pichia pastoris and Brevibacillus was tested. S. Borealis has three types of LPMO candidates. Coliform bacteria are not soluble in water, but soluble in organic matter. Pichia pastoris is a kind of natural medicine. The two species of sbLPMO are identified by the following methods: The C-terminal side of the LPMO was added to the His-tag. In the presence of peracidified water, the decomposition activity of sbLPMO was adjusted to pH 8 and the maximum activity was shown. The new enzyme, S. Borealis's website is currently under development. In addition, there are some differences in the base arrangement of sbCDH, such as the existence of multiple bases, the comparison of the base arrangement of sbCDH, and the appropriateness of the base arrangement of sbCDH.

项目成果

Development of the crystalline cellulose degradation system consisting of the psychrophilic fungus-type hybrid enzymes

由嗜冷真菌型杂合酶组成的结晶纤维素降解系统的开发

• 发表时间: 2020
• 作者: Masataka Horiuchi;Shiro Kuninaga;Izumi Saito;Masato Katahira;Takashi Nagata
• 通讯作者: Takashi Nagata

オッセオインテグレーション関連因子を用いたインプラント周囲骨再生治療の開発

利用骨整合相关因子开发种植体周围骨再生治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 堀内留美;堀内正隆;横山敦郎
• 通讯作者: 横山敦郎

構造解析のための FGF5 と aptamer の調製

FGF5和适体的制备用于结构分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 植草 友也;笹生 みなみ;天野 亮;行方 昌人;堀内 正隆;柳澤 拓也;西本 翔;田中 陽一郎;Farhana Ishrat Ghani;山本 昌邦;坂本 泰一
• 通讯作者: 坂本 泰一

線維芽細胞増殖因子FGF5に対するAptamerの開発

成纤维细胞生长因子FGF5适体的开发

• 发表时间: 2022
• 作者: Jo Michiko;Koizumi Keiichi;Suzuki Mizuho;Kanayama Daisuke;Watanabe Yurie;Gouda Hiroaki;Mori Hisashi;Mizuguchi Mineyuki;Obita Takayuki;Nabeshima Yuko;Toyooka Naoki;Okada Takuya;天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一
• 通讯作者: 天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一