ブタ始原生殖細胞の体外培養およびブタEG細胞株の作出

猪原始生殖细胞的体外培养及猪EG细胞系的产生

• 批准号: 09760252
• 负责人: 高木 優二
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760252/
• 关键词: ブタ; 始原生殖細胞; PGC; EG細胞; ES細胞

マウス胚性幹(ES)細胞や始原生殖(PGC)細胞由来のEG細胞のように多能性を維持し、さらに次世代の子孫が得られる細胞株は、ブタをはじめ家畜では得られていない。そこで本研究では、妊娠22〜33日齢のブタ胎仔よりPGC細胞を採取し、EG細胞株を樹立するために体外培養を試みた。本研究の結果から以下の知見が得られた。1)胎仔の生殖隆起をコラーゲナーゼ・ディスパーゼ液で解離後、抗体磁気ビーズを用いて選択的にPGC細胞を単離・精製する手法につい検討した。その結果、高い回収率、高い純度でPGC細胞が得られることが明らかとなった。しかしながら、得られたPGC細胞の生存率は低く、胎仔採取から細胞の分離までの処理方法についてさらに検討する必要があることが示唆された。2)膜結合型SCF(幹細胞成長因子)を発現するフィーダー細胞(S14-m220細胞)を用いて、PGC細胞の培養を試みた。その結果、S14-m220細胞をフィーダー細胞に用いることによりPGC細胞数がSTO細胞に比べ多くなることが明らかとなった。3)PGC細胞の培養における成長因子の影響について検討した。その結果、PGC細胞をLIF(白血病成長因子)、SCF、bFGF(塩基性線維芽細胞成長因子)の成長因子を添加した培養液中で培養した場合、PGC細胞の増殖は促進されなかった。しかし、これらの因子の他にFK(フォリスコリン)を添加した培養液中で培養した場合、ALP活性の高い細胞が著しく多く増殖することが明らかとなった。Buffalo Rat Liver(BRL)細胞の培養上清液およびアセチルシステインについても検討したが、これらには著しい促進効果は認めれれなかった。以上の培養条件下で継代培養を試みたが、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性およびSSEA-1抗体陽性のES細胞様の細胞株は得られなかった。

The origin of embryogenic (ES) primordial reproduction (PGC) cells is that the pluripotency of EG cells is maintained, that of the offspring of the next generation is maintained, and that of domestic animals is obtained. During the period of 22-33 days of pregnancy, the PGC cells were harvested and the EG cell lines were isolated and cultured in vitro. The results of this study show that the following insights are highly appreciated. 1) after the fetal protuberance was released, the antibody magnetism was performed using the selected PGC cell, the sperm was isolated and the manipulation was performed. The results, high return rate, and high temperature PGC cell are very sensitive to the results. The survival rate of PGC cells is low, and the fetus is separated from each other. The method of diagnosis and treatment is necessary. 2) membrane-combined SCF (cell growth factor) was used to detect the growth rate of S14-m220 cells and PGC cells. The results show that the number of S14-m220 cells is much higher than that of STO cells. The number of STO cells is higher than that of STO cells. 3) the growth factor of PGC cell culture has a significant effect on the growth rate. Results: PGC cell growth factor LIF (leukemic growth factor), SCF, bFGF (basic line maintenance bud cell growth factor) were added to the culture medium, and PGC cell colonization was used to promote cell proliferation. The factor "FK" was added to the culture solution, and the active cells of ALP were added to the culture solution. The supernatant of Buffalo Rat Liver (BRL) cells was incubated. The supernatant was incubated and the supernatant was incubated with the supernatant. Under the above culture conditions, the cell lines were obtained by culturing the cell lines with the activity of ALP, the SSEA-1 antibody, the ES cell line, the cell line.