权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

インスリン様成長因子^Iの生理活性を増強するcAMP依存性チロシンキナーゼの探索

寻找增强胰岛素样生长因子^I生理活性的cAMP依赖性酪氨酸激酶

基本信息

批准号：
09760250
负责人：
伯野史彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞は、甲状腺刺激ホルモンであるTSHまたはcAMP情報伝達系を活性化する薬剤で長時間前処理した後IGF-Iで処理することにより、それぞれを単独で処理した場合に比べて相乗的にDNA合成が増強される。またこのTSHによるいわゆるprimingは、1)チロシンキナーゼに対する特異的な阻害剤であるgenisteinによって阻害される、2)DNA合成の阻害剤であるcyclohexymideによって阻害される、3)TSH処理に依存してチロシンリン酸化の増加するタンパク質が細胞内に存在する、ことから、cAMP経路の長時間の活性化によってあるチロシンキナーゼが合成され活性化されて、primingに重要な機能を果たしている可能性が考えられた。本研究はラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞を用いてcAMP刺激によって発現量または活性の変化するチロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを目的としている。cAMPのアナログであるBt_2cAMPで長時間処理した細胞と処理していない細胞とから抽出したRNAを鋳型とし、チロシンキンナーゼで保存されたアミノ酸配列から作製されたプライマーを用いてRT-PCRを行い、チロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを試みた。その結果、現在までに既知のチロシンキナーゼが10種類単離された。このうち、JAKlおよびp56tckに対して特異的なプライマーを作製し、定量的RT-PCRを行うと、p56tck遺伝子の転写量がcAMP刺激により顕著に増加することが示された。今後、この遺伝子に関してcAMP処理によるタンパク質量、活性化量の変化についても検討を加えていきたい。

Thyroid derived cells FRTL-5 cells respond to thyroid stimulation by activating cAMP signaling pathways after long-term pretreatment with IGF-I. 1) Specific inhibitors of DNA synthesis are genistein inhibitors; 2) Inhibitors of DNA synthesis are cyclohexymide inhibitors; 3)TSH treatment-dependent increase in the intracellular presence of cAMP; and long-term activation of cAMP pathway. Priming important functions and possibilities This study aims to investigate the expression of cAMP in thyroid-derived FRTL-5 cells. cAMP is processed for a long time, and RNA is extracted from the cells. As a result, there are now 10 types of separation between the known communities. This is shown by the increase in the amount of RT-PCR and p56 tck DNA in response to cAMP stimulation. In the future, the gene is related to cAMP treatment, such as quality, activation and transformation.