インスリン様成長因子^Iの生理活性を増強するcAMP依存性チロシンキナーゼの探索

寻找增强胰岛素样生长因子^I生理活性的cAMP依赖性酪氨酸激酶

基本信息

批准号：
09760250
负责人：
伯野史彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞は、甲状腺刺激ホルモンであるTSHまたはcAMP情報伝達系を活性化する薬剤で長時間前処理した後IGF-Iで処理することにより、それぞれを単独で処理した場合に比べて相乗的にDNA合成が増強される。またこのTSHによるいわゆるprimingは、1)チロシンキナーゼに対する特異的な阻害剤であるgenisteinによって阻害される、2)DNA合成の阻害剤であるcyclohexymideによって阻害される、3)TSH処理に依存してチロシンリン酸化の増加するタンパク質が細胞内に存在する、ことから、cAMP経路の長時間の活性化によってあるチロシンキナーゼが合成され活性化されて、primingに重要な機能を果たしている可能性が考えられた。本研究はラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞を用いてcAMP刺激によって発現量または活性の変化するチロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを目的としている。cAMPのアナログであるBt_2cAMPで長時間処理した細胞と処理していない細胞とから抽出したRNAを鋳型とし、チロシンキンナーゼで保存されたアミノ酸配列から作製されたプライマーを用いてRT-PCRを行い、チロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを試みた。その結果、現在までに既知のチロシンキナーゼが10種類単離された。このうち、JAKlおよびp56tckに対して特異的なプライマーを作製し、定量的RT-PCRを行うと、p56tck遺伝子の転写量がcAMP刺激により顕著に増加することが示された。今後、この遺伝子に関してcAMP処理によるタンパク質量、活性化量の変化についても検討を加えていきたい。

大鼠甲状腺衍生的细胞FRTL-5细胞长时间预处理使用一种药物，该药物激活甲状腺刺激的激素TSH或CAMP信号传导系统，然后用IGF-I处理，该药物与每个人单独处理时，可以协同增强DNA合成。此外，TSH所谓的启动可能为1）染料木黄酮（一种特异性的酪氨酸激酶抑制剂）抑制，2）被环己二酰胺抑制（DNA合成的抑制剂）抑制，3）蛋白质会增加酪氨酸磷酸化的酪氨酸磷酸化，这会导致酪氨酸磷酸化在THE构成中，可能会导致THE构成，并在THE构成中，并激活合成，并激活合成，并激活合成，并激活合成。通过长时间的cAMP通路激活，从而执行启动的重要功能。这项研究旨在克隆酪氨酸激酶基因，其表达水平或活性在使用大鼠甲状腺衍生的细胞FRTL-5细胞刺激cAMP时会发生变化。使用从已用BT_2CAMP（cAMP的类似物）和未经处理的细胞进行长时间处理的细胞中提取的RNA，作为模板，使用用酪氨酸酶保守的氨基酸序列产生的引物，并尝试克隆酪氨酸激酶基因。结果，迄今为止已经隔离了10种已知的酪氨酸激酶。其中，当制备针对JAKL和P56TCK的引物并进行定量RT-PCR时，表明P56TCK基因的转录量通过cAMP刺激显着增加。将来，我们还将考虑由于营地治疗而导致的蛋白质含量和激活量的变化。