インスリン様成長因子^Iの生理活性を増強するcAMP依存性チロシンキナーゼの探索

寻找增强胰岛素样生长因子^I生理活性的cAMP依赖性酪氨酸激酶

• 批准号: 09760250
• 负责人: 伯野 史彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760250/
• 关键词: インスリン様成長因子^I; チロシンキナーゼ; 情報のクロストーク; cAMP; インスリン様成長因子I; differential display; cAMP経路; 情報伝達

ラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞は、甲状腺刺激ホルモンであるTSHまたはcAMP情報伝達系を活性化する薬剤で長時間前処理した後IGF-Iで処理することにより、それぞれを単独で処理した場合に比べて相乗的にDNA合成が増強される。またこのTSHによるいわゆるprimingは、1)チロシンキナーゼに対する特異的な阻害剤であるgenisteinによって阻害される、2)DNA合成の阻害剤であるcyclohexymideによって阻害される、3)TSH処理に依存してチロシンリン酸化の増加するタンパク質が細胞内に存在する、ことから、cAMP経路の長時間の活性化によってあるチロシンキナーゼが合成され活性化されて、primingに重要な機能を果たしている可能性が考えられた。本研究はラット甲状腺由来細胞FRTL-5細胞を用いてcAMP刺激によって発現量または活性の変化するチロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを目的としている。cAMPのアナログであるBt_2cAMPで長時間処理した細胞と処理していない細胞とから抽出したRNAを鋳型とし、チロシンキンナーゼで保存されたアミノ酸配列から作製されたプライマーを用いてRT-PCRを行い、チロシンキナーゼ遺伝子のクローニングを試みた。その結果、現在までに既知のチロシンキナーゼが10種類単離された。このうち、JAKlおよびp56tckに対して特異的なプライマーを作製し、定量的RT-PCRを行うと、p56tck遺伝子の転写量がcAMP刺激により顕著に増加することが示された。今後、この遺伝子に関してcAMP処理によるタンパク質量、活性化量の変化についても検討を加えていきたい。

ラ ッ ト thyroid origin cells FRTL - 5 は, thyroid stimulation ホ ル モ ン で あ る TSH ま た は cAMP intelligence 伝 da system を activeness す る 薬 tonic で long time ago 処 し た IGF - I で 処 Richard す る こ と に よ り, そ れ ぞ れ を 単 alone で 処 Richard し に た occasion than べ て in 乗 に DNA synthesis が raised strong さ れ る. ま た こ の TSH に よ る い わ ゆ る priming は, 1) チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ に す seaborne る specific な resistance against tonic で あ る genistein に よ っ て resistance against さ れ る, 2) DNA synthesis の resistance against tonic で あ る cyclohexymide に よ っ て resistance against さ れ る, 3) TSH 処 に dependent し て チ ロ シ ン リ ン acidification の raised plus す る タ ン パ ク qualitative が に exists in cells す る, こ と か ら, cAMP の 経 road long の activeness に よ っ て あ る チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ が synthetic さ れ activeness さ れ て, priming に important function of な を fruit た し て い る possibility が exam え ら れ た. This study は ラ ッ ト thyroid origin cells FRTL - 5 を with い て cAMP stimulus に よ っ て 発 now quantity ま た の は activity - the す る チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ を purpose と し て い る. CAMP の ア ナ ロ グ で あ る Bt_2cAMP で long time 処 し た cells と 処 Richard し て い な い cells と か ら spare し た RNA を type where と し, チ ロ シ ン キ ン ナ ー ゼ で save さ れ た ア ミ ノ acid with column か ら cropping さ れ た プ ラ イ マ ー を with い て rt-pcr を い, チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン Youdaoplaceholder0 try みた. Youdaoplaceholder0 そ result, now までに it is known that <s:1> チロシ キナ キナ ゼが ゼが10 kinds 単 are apart from された. こ の う ち, JAKl お よ び p56tck に し seaborne て specific な プ ラ イ マ ー を of し, quantitative rt-pcr を line う と, p56tck but 伝 の planning write quantity が cAMP stimulus に よ り 顕 with に raised す る こ と が shown さ れ た. Son in the future, こ の heritage 伝 に masato し て cAMP 処 Richard に よ る タ ン パ ク quality, activation volume の variations change に つ い て も を 検 please add え て い き た い.

项目成果

T.Koide et.al.: "Insulin-Like Growth Factor-I Potentiates Protein Synthesis Induced by Thyrotropin in FRTL-5 Cells:Comparison of Induction of Protein Synthesis and DNA Synthesis" ENDOCRINE JOURNAL. 45・2. (1998)

T.Koide 等：“胰岛素样生长因子-I 增强 FRTL-5 细胞中促甲状腺素诱导的蛋白质合成：蛋白质合成和 DNA 合成诱导的比较”内分泌杂志 45・2。

高橋 伸一郎、伯野 史彦: "インスリン様成長因子をめぐる話題" BIO Clinica. 13(11). 963-969 (1998)

Shinichiro Takahashi、Fumihiko Hakuno：“有关胰岛素样生长因子的主题”BIO Clinica 13(11)。

高橋 伸一郎、伯野 史彦: "インスリン様成長因子の細胞内シグナル伝達" ホルモンと臨床. 46(2). 89-103 (1998)

Shinichiro Takahashi、Fumihiko Hakuno：“胰岛素样生长因子的细胞内信号转导”激素与临床科学 46(2) (1998)。

高橋 伸一郎、伯野史彦: "インスリン様成長因子の細胞内シグナル伝達" ホルモンと臨床、別冊. 46(2). 89-103 (1998)

Shinichiro Takahashi，Fumihiko Hakuno：“胰岛素样生长因子的细胞内信号转导”激素和临床研究，特刊 46（2）（1998）。

Koide,T.et.al.: "Insulin-like growlh factor potentiales protein synthesis induced by thyrotropin in FRTL-5 cells:Comparison of induction of protein synthesis and DNA synthesis." Endocrine Journal. 45(2). 151-163 (1998)

Koide,T.et.al.：“FRTL-5 细胞中促甲状腺素诱导的胰岛素样生长因子可能诱导蛋白质合成：诱导蛋白质合成和 DNA 合成的比较。”